花生壳中总黄酮及木犀草素提取的工艺研究 | 花生壳中总黄酮及木犀草素提取的工艺研究 |
| 发布时间:2014-09-19 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2147 |
花生壳中总黄酮和木犀草素提取工艺研究
为评价指标，优选提取工艺。确立以75％乙醇为溶剂，料液比1：10，每次提取2h，提取3次为优选工艺， 花生壳中总黄酮和木犀草素均可有效提取。该工艺简捷、经济、可行，适合工业化生产。 Study on Technology of Extracting Totall Flavonoid and Luteolin from Peanut Hulls Abstract:To study the optinum technology of extraction totall flavonoid and luteolin from peanut hulls. To optinum technology of extraction with the content of totall flavonoid and luteolin in the extract as reference by orthogonality experiments. The optimum condition with ethanol extraction was as follows, 75% ethanol solution as solvent,ratio of liquid to solid 10 ： 1, extraction time was two hours,extraction totall flavonoid and luteolin in the extract was obtained. The number of times was third,and the highest content of method is simple,economical and is reliable for the industrial production. Key words:peanut hull ; totall flavonoid; luteolin; orthogonality experiments 花生壳(Peanut hul1)是豆科一年生草本植物花生 (Arachis hypogeae L．)的干燥果壳，我国有丰富的资 源。 花生壳作中草药，其标准已收载于1996年版《云南省药 品标准》[1]。在花生壳的有效组分总黄酮中 ，以木犀草素 含量最高。研究[2-6]证明，花生壳提取物中总黄酮不仅具 有降血脂和降血压的作用，同时 还有抗氧化、镇咳平喘、 抗菌消炎及增强免疫和抗肿瘤的作用。为更好地开发和 利用花生壳资源，本文 采用正交试验法【 {研究花生壳的 有效成分总黄酮及木犀草素的提取工艺。 1实验部分 1．1 材料与仪器 花生壳(产地：安徽)；芦丁(中检所，批号100080— 200306)；木犀草素对照品(中检所，批号111520— 200201)；甲醇(色谱纯)，乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧 化钠、磷酸(分析纯)，重蒸水(自制)。 旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)；真空干燥箱 (ZK一82A型，上海实验仪器厂)；高效液相色谱仪(SPD 一 10Avp，LC一10Atvp，日本岛津)；紫外一可见分光光度计 (6010型，安捷仑科技有限公司)；电子天平 (G258型，德 国梅特勒公司)。 1．2 实验方法 1．2．1药材预处理 将花生壳用冷水洗净，于60℃干燥4h，粉碎成粗 粉，备用。 1．2．2提取物溶液的制备 药材粗粉一溶媒浸湿一回流提取一趁热抽滤一滤 液减压浓缩一乙醇溶解定容。 木犀草素优质供应商长沙上禾生物 1．2．3提取物中总黄酮的含量测定 ① 样品配置 对照品溶液配置：精密称取在80℃减压干燥至恒重 的芦丁对照品lOmg，置100mL容量瓶中，加75％乙醇 80mL，置水浴微热使溶解，放冷，加75％乙醇至刻度，摇 匀，作对照品溶液。 供试品溶液配置：精密量取提取物溶液2mL，置 25mL容量瓶中，加75％乙醇稀释并定容，摇匀，过滤，取 续滤液，作供试品溶液。 木犀草素优质供应商长沙上禾生物 ② 样品测定 量取供试品溶液2mL，置10mL于容量瓶中，补 75％乙醇3mL，加5％亚硝酸钠溶液0．3mL，摇匀，放置 6min后分别加10％硝酸铝溶液0．3mL，摇匀，放置 6min，再分别加4％氢氧化钠试液4mL， 再加水至刻度 ， 摇匀，放置10min。按照分光光度法在510nm波长处测 定吸收度值，代人标准曲线计算总黄酮含量。 1．2．4提取物中木犀草素含量的测定 ① 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱ODS Luna(2)51xm，4．6mmx250mm)；流动 相：甲醇一0．4％磷酸水溶液(60：40)；流速：lmL／ min；检测 波长：350nm；进样量：201．zL。 ② 样品配置 对照品溶液配置：精密称取木犀草素对照品适量， 用流动相溶解并稀释，制成201xg／mL的溶液，作为对 照 品溶液。 供试品溶液配置：精密量取提取物浓缩液lmL，置 10mL容量瓶中，加流动相稀释并定容，摇匀，过滤，取 续 滤液，作为供试品溶液 ③ 样品测定 分别取对照品溶液和供试品溶液20lxL，注入液相 色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。 2结果与讨论 2．1 乙醇提取工艺的研究 2．1．1正交试验方案(三水平四因素)设计 以乙醇浓度、料液比、提取时间和提取次数作因素， 分别考察三个梯度水平。通过正交试验设计，以总 黄酮 和木犀草素提取量作为评价指标，权重指标分别取0．2、 0．8，进行综合评价。总评价值=0．2×总 黄酮+木犀草素× 0．8，优选提取工艺。试验因素与水平见表1。 表1 因素水平表
2．1．2 正交试验结果及方差分析 表2 I-9(34i,-1=交试验表
注： (2，2)=19．00 Fool(2，2)=99．0 正交试验结果及方差分析：因素试验中A>D>C>B， 即乙醇浓度>提取次数>提取时间>料液比；水平试验中 A：I<2>K3>K1，B：Ks≥K2≥Kl，C：K3≥K2>Kl，D：K3≥K2> K。。结合方差显著性分析：因素B的各水平 对试验结果影响无显著性差异，因素C影响相对较小。从能耗与经 济角度优选B 和C ，由此得出优选方案 为A2BzCzD，。 即：75％乙醇，10倍量料液比，每次提取2h，提取3次。 2．2 总黄酮含量测定方法学验证 2．2．1标准曲线 精密吸取芦丁对照品溶液lmL、2mL、3mL、4mL、 5mL，分别置于10mL容量瓶中，依次补加75％乙醇4、 3 、2、1、0mL，再加5％亚硝酸钠溶液0．3mL，摇匀，放置 6min后分别加10％硝酸铝溶液0．3mL，摇匀，放 置 6min，再分别加4％氢氧化钠试液4mL，再加水至刻度， 摇匀，放置10min，按照分光光度法在510nm波 长处测 定吸收度值。以吸收度值为纵坐标，浓度为横坐标，得回 归方程：A=12．682C一0．0329，r=-0． 9996。结果表明，芦丁在 10～50lxg／mL的浓度范围内与吸收度显良好线性关系。 2．2．2重复性试验 取同一批次提取物供试溶液6份各lmL，按标准曲 线测定方法依法配置并测定，结果供试溶液含量的RSD 为1．87％，表明本方法精密度良好。 木犀草素优质供应商长沙上禾生物 2．2．3回收率试验 取已测定含量的提取物供试溶液，按高、中、低浓度 各平行配置3份，分别加入适量对照品溶液，依法测 定， 结果供试溶液的高、中、低浓度的平均加样回收率为 99．23％，ltSD为1．67％，表明本方法的准确 度高。 2．2．4稳定性考察 取供试溶液lmL依法显色放置10min后，在室温 条件下分别在0h、1h、2h、4h、8h测定吸收度A值，RSD 为 1．98％，表明供试液在室温条件下8h内稳定。 木犀草素优质供应商长沙上禾生物 2．3 木犀草素含量测定方法学验证 2．3．1 专属性试验 分别取木犀草素对照品溶液和供试品溶液，按照色 谱条件进样，记录色谱图，见图1。图1表明，供试品 溶 液中木犀草素与其它成分有效分离，专属性强。 木犀草素优质供应商长沙上禾生物 2．3．2线性范围 精密称取木犀草素对照品适量，用甲醇超声溶解并 稀释制成50lxg／mL的标准溶液，精密量取标准溶液 lmL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL置于10mL容量瓶中，用 流动相稀释并定容，摇匀，按上述色谱条件进样测 定，以 木犀草素峰面积A为纵坐标，进样浓度C(wg／mL)为横 坐标，得回归方程为：A=55754C+8559．5， r-0．9998。结 果木犀草素浓度在5~30lxg／mL范围内线性关系良好。 2．3．3 重复性试验 取同一批次提取物浓缩液样品5份，依法配置并i贝4 定，结果供试品溶液含量的RSD％为1．22％。
A一木犀草素对照品；B一木犀草素提取物样品 木犀草素优质供应商长沙上禾生物 图1 色谱图 2．3．4 回收率试验 取已测定含量的提取物浓缩液，按高、中、低浓度各 平行配置3份，分别加入适量的对照品溶液，依法测 定， 结果供试品溶液的高、中、低浓度的平均加样回收率为 98．9％，RSD为2．08％。 2．3．5 稳定性试验 取供试品溶液，室温条件下分别在0h、lh、2h、4h、 8h、12h测定，以峰面积计，RSD为1．15％，结果表 明供试 品溶液在室温条件下12h内稳定。 3 结语 文献[11-I4】报道提取花生壳有效成分的方法有溶剂 法、超声法、微波法及超临界CO 法等，其中溶剂提 取法 报道较多，多以甲醇、丙酮和乙酸乙酯为提取溶剂。本文通过上述溶剂预试与乙醇对比，结果在总黄 酮提取率上 无显著性差异，因此，本文在综合工业生产设备、成本及 安全性等因素下，选择乙醇作提取 溶剂。在正交试验设 计评价值中因总黄酮含量是木犀草素的4～5倍，故采用 权重指标0．2和0．8进行平 衡。 木犀草素优质供应商长沙上禾生物 www.staherb.com |
