芦荟大黄素、芦荟素清除氧自由基作用的研究

摘　要:目的：研究芦荟大黄素和芦荟素对超氧阴离子自由基（O2^-·）、羟自由基（·OH）的清除作用。方法：采用邻苯三酚自氧化体系产生（O2^-·），研究芦荟大黄素、芦荟素对O2^-·的清除作用；利用Fenton反应产生·OH，研究芦荟大黄素、芦荟素对·OH的清除作用；计算表观清除率及IC50,并与特异性清除剂维生素C做比较。结果：芦荟大黄素、芦荟素、维生素C对O2^-·的IC50分别为6．8，8、5，11mg·L^-1，对·OH的IC50分别为0．24，0．25，9．1mg·L^-1，其清除能力芦荟大黄素〉芦荟素〉维生素C。结论：芦荟大黄素、芦荟素对O2^-·、·OH均有较强清除能力，且清除能力与浓度呈明显的量效关系。

 关键词:芦荟大黄素 芦荟素 清除 氧自由基 量效关系  上禾生物

 Study of aloe-emodin and emodin scavenging oxy-free radicals

 Abstract:OBJECTIVE To study the effects of aloe-emodin and emodin on scavenging superoxide anion free radical（ O2^-· ）and hydroxy free radical（·OH）. METHODS O2^-·was produced by 1,2,3 -benzentriol autooxidation systems and ·OH was produced by fenton reaction. The scavenging effects of aloe-emodin and emodin on O2^- ·and · OH were determined and compared with that of vitamin C,and were accumulated scavenging rate and IC50. RESULTS IC50 of scavenging effects of aloe-emodin and emodin and vitamin C on O2^- .were 6.8,8.5 and 11 mg·L^-1 , IC50 of scavenging effects of aloe-emodin and emodin and vitamin C on .OH were 0.24, 0.25 and 9.1 mg·L^ - 1 ;the potency of scavenging free radicals was aloe-emodin 〉 emodin 〉 vitamin C. CONCLUSION Aloe-emodin and emodin have strong clearing function on O2^- ·and · OH, and the clearance is obviously related to the concentration.

 Key words:aloe-emodin; emodin; scavenging;superoxide anion free radical（ O2^-· ） ; hydroxy free radical（·OH）

 超氧阴离子自由基[Oi·]、羟自由基[·OH]等 称为氧自由基，许多病理生理现象如衰老、肿瘤、炎症及脑缺血等都与氧自由基有密切关系 ’ 。因 此，在中草药中寻找高效无不良反应的天然自由基 清除剂的研究，成为医药学活跃的研究领域。芦荟大黄素和芦荟素是芦荟主要药用成分，存在于芦荟 的叶皮内 ，临床研究表明其具有抗菌、消炎、杀 虫、抗癌、泻下、抗衰老等功效 。芦荟大黄素和芦 荟素是含有酚羟基的蒽醌类化合物，而酚羟基是许 多天然抗氧化剂的功能基团。研究芦荟大黄素和芦荟素对超氧阴离子自由基(SAFR)和羟自由基 (HFR)的清除作用，旨在为芦荟的药用价值和开发提供依据。

 1 材料

 752PC型紫外分光光度计(上海光谱仪器公 司)；芦荟大黄素(中国药品制品生物检定所)；芦 荟素(中国药品制品生物检定所)；抗坏血酸，番红花红(safranine．T)(天津市光华化学厂)；试剂均为 分析纯。

 2 方法

 2．1 药品的配制

 分别称取芦荟大黄素和芦荟素 12．5 mg，用无水乙醇溶解，并稀释定容于25 mL量 瓶，摇匀得0．50 g·L 标准溶液。稀释成0．050 g· L 和0．005 0 g·L 操作液。

 2．2 超氧阴离子(Oj·)清除率的测定

 在0．05 mol·L～pH 8．2的Tris．盐酸缓冲液3．0 mL中，加入 不同体积的0．050 g·L 药物后，均加入2．5 mmo|· L 邻苯三酚0．5 mL，各管相应补水至总体积为5 mL，混匀后在25℃水浴保温10 min，立即加入8 mol·L 盐酸2滴终止反应。注射用水调零，在 299 nm处测定吸收度A，结果见表1。分组：空未损组=不含药物及[O ·]；空损组=不含药物但含 [Oi·]；药损组=含药物及[Oi·]；药未损组=含 药物但不含[Oj·]。未损管不加邻苯三酚，清除率d按下式计算 ：d=[1一(A药损一A药未损)]／(A空损 一A空未损)

 表1 不同浓度芦荟大黄素及芦荟素对0；·清除作用

 Tab I Scavenging rate for 0；·using aloe-emodin and emodin with different concentration

 2．3 羟自由基(·OH)清除率的测定

 在0．15 mmol·L～，pH 7．4的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲 液3．0 mL中、加入不同体积的0．005 0g·L 药物 后，均加人40 mg·L 番红花红1 mL，3％双氧水1 mL(新鲜配制)，1 mmol·L～EDTA-FeH1 mL，各管 相应补水至总体积为5 mL，混匀后在37℃水浴反 应30 min，立即加人0．1 tool·L EDTA 0．2 mL终 止反应。对照品以纯化水代替EDTA—Fe 和供试 品，注射用水调零，在520 rim处测定吸收度4，结果 见表2。以维生素C(当天配制)做阳性对照组，按 以下公式计算HFE清除率：d=(A样品一A空白)／ (A对照一A空白)

 表2 不同浓度芦荟大黄素及芦荟素对·OH清除作用

 Tab 2 Scavengingrate ·OH for using aloe-emodin and emodin with diferent concentratiOns

 2．4 数据处理 各活性物按5个不同浓度检测， 每个浓度5个样管，取其均数计算清除率。对于每 种样品以清除率为纵坐标，样品浓度为横坐标，以半 数清除浓度(Ic 。)比较其清除0i·和·OH的能力。

 3 结果

 3．1 芦荟大黄素和芦荟素对0；·清除作用 从表1 可见，浓度愈大，抑制百分率也愈大，表明芦荟大黄素及芦荟素对0；·清除能力与浓度呈量效关系，但 浓度大到一定时，其量效关系不明显。根据半数浓度IC ，芦荟大黄素及芦荟素对SAFR清除作用的 能力均高于SAFR的特异性清除剂维生素c，其中 芦荟大黄素强于芦荟素。

 3．2 芦荟大黄素及芦荟素对·OH清除作用 从表 2结果可见，随着芦荟大黄素及芦荟素浓度增加，清 除率几乎直线上升趋势，这两种药品对·OH清除作 用特别强，当芦荟大黄素及芦荟素浓度分别为0．001 g·L 和0．000 6 g·L 时，其对·OH清除率高达 90。3％和96．4％ ，再加大浓度时，清除率趋于平缓。根据半数有效浓度Ic 芦荟大黄素及芦荟素对· OH清除作用的能力均高于维生素c，约是其40倍， 其中芦荟大黄素略强于芦荟素。

 4 讨论

 芦荟作为传统的中药，具有良好的抗菌、消炎、抗肿瘤、抗辐射损伤、降压降糖、抗衰老及预防艾滋 病 等药理作用。而芦荟大黄素和芦荟素是芦荟 主要药用成分，临床研究表明其具有抗菌、消炎、杀 虫、抗癌、泻下、抗衰老等功效。芦荟大黄素和芦荟素含有多个酚羟基蒽醌类化合物，蒽醌类化合物具 有对0i·的清除作用主要是通过它们含有的酚羟基 基团与超氧阴离子发生了单电子转移的氧化还原反应所致。清除·OH，系芦荟大黄素和芦荟素的酚羟基 和醇基能够提供活泼的质子。游离质子愈多，其易 与羟自由基快速地结合成稳定的产物 J，对·OH的 清除能力越强。芦荟大黄素、芦荟素对0 ·和·OH 均有很强的清除能力，浓度愈大，抑制百分率也愈 大，表明芦荟大黄素及芦荟素对O ·和·OH清除能 力与浓度有明显的量效关系。根据半数有效浓度 Ic 清除自由基能力均高于特异性清除剂维生素 c。特别是这两种物质，对·OH的清除能力特别强， 两者浓度为0．001 g·L 和0．000 6 g·L 时，其对 ·OH清除率高达90．3％和96．4％ ，其Ic约是维生素 c的1／40，能有效清除·OH。·OH清除率是反映药 物抗氧化作用的重要指标，芦荟大黄素和芦荟素优 于维生素c，是天然高效的自由基清除剂。芦荟大黄素和芦荟素易溶于有机溶剂中而难溶于水，这种 特性使之在体内抗氧化的效果更好。