阿霉素(Adriamycin，ADR)属于葸环类抗生素，广泛应用于 急、慢性白血病，淋巴瘤以及各种实体瘤的治疗过程中。但是， 随着阿霉素使用的增加，急慢心肌损伤成为其l临床应用的主要 障碍” ]。芹菜素(Apigenin，API)是一种黄酮类化合物，广泛存在于各种水果、蔬菜和某些植物中，具有神经保护、抗氧化、清除 自由基、抗肿瘤、抗炎、免疫凋节等作用。越来越多的研究提示， 芹菜素可通过多种途径发挥对心血管系统损伤的保护作 用 j。本实验通过制备大鼠阿霉素性急性心肌损伤模型，来观 察芹菜素在大鼠阿霉索性心肌损伤中发挥的作用。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 实验药品、试剂、仪器阿霉素，浙江海正药业股份有限 公司(批号：20081107)；芹菜素，陕西慧科植物开发有限公司(批 号：AP20070823)；TLR4免疫组化试剂盒，购自武汉博士德生 物工程公司；CK—MB的EI ISA检测试剂盒，购自上海越研生物科技有限公司。显微镜及图形分析系统、多功能酶标仪等。

1．1．2 实验动物健康雄性SD大鼠40只，清洁级，体重20Og~250 g，由山西医科大学实验动物中心提供。

1．2 方法

1．2．1 动物分组及处理 雄性SD大鼠4O只，随机分为5组 (每组8只)：CONTROl— ADR、ADR+ API[L]、ADR+API [M]、ADR~API[H]。ADR+API各组于实验开始的第一天 起每天分别腹腔注射7．5 mg／kg、15 mg／kg、3O mg／kg的芹莱 素，共5 d；CONTROL组和ADR组每天注射等体积的生理盐 水，共5 d；除CONTROL组外，其他实验组均于实验的第6天 一次性腹腔注射15 mg／kg阿霉素。CONTROL组注射等体积 的生理盐水。所有实验动物均于实验第8天采血后使用断头法 处死。

1．2．2 病理组织学观察 剪取部分游离左室壁组织，10 甲醛 固定；常规石蜡包埋，切片4 fm。取制作好的切片，HE染色，光 镜下作组织病理学观察。

1．2．3 心肌细胞TLR4的免疫组化检测 取制作好的石蜡切 片，常规脱蜡至水，3 H。O。消除内源性过氧化物酶，0．1 胰 蛋白酶进行抗原修复，以TI R4一抗4℃过夜，二抗室温孵育，DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。免疫组化阳性反应 为细胞浆内具有棕黄色颗粒沉积。在400倍的视野下，每张切 片随机选择1O个位点，对其染色强度进行自动分析，结果用灰 度值表示。

1．2．4 血清心肌酶检测 严格按照CK—MB的ELISA试剂 盒说明操作，按序进行标准品的稀释与加样、温育、洗涤、加酶、 温育、洗涤、显色等。

1．3 统计学处理计量资料以均数± 标准差( ±s)表示，采用 SPSS 13．0软件进行分析，多组间均数比较采用单因素方差分 析，多组间均数两两比较采用Bonferroni方法进行。

2 结 果

2．1 心肌组织光镜下病理形态学观察 在光镜下，c()NTROL 组心肌细胞排列整齐，横纹清晰可见，细胞间隙正常；ADR组的 心肌细胞横纹模糊消失，心肌纤维出现扭曲、断裂，细胞间隙明 显增宽；ADR+API各组，中剂量、高剂量组心肌损伤表现明显 改善，心肌纤维断裂的程度明显轻于ADR组，而低剂量组表现 不是很明显。

2．2 心肌细胞TLR4免疫组化灰度值(GREY)变化 与 CONTROL组比较，ADR组的GREY值明显降低(P< 0．01)；与 ADR组比较，ADR+ API各组的GREY值升高，ADR+API (L)组的GREY值升高不明显；ADR+ API(M)与ADR+API (H)两组的GREY值升高明显(P<0．01)。详见表1。

2．3 血清心肌酶CK —MB改变 与C()NTR0L组相比较， ADR组的CK—MB值明显升高(P< O．01)；与ADR组相比较， ADR+ API各组的CK—MB值降低，ADR+ API(L)组的 CK—MB值降低不明显；ADR+API(M)与ADR+AI 1f H)两 组的CK MB值降低明显(P％0．01)。详见表1。

3 讨 论

阿霉素是一种抗瘤活性强的蒽环类化疗药物，目前被广泛 应用于多种恶性肿瘤的治疗。当阿霉素累积量>550 mg／m 时，心衰发生率高达26 ，而使用剂量达到700 mg／m 时，心衰 发生率高达48 ∞]。探讨阿霉素心肌损伤的机制，并寻求解决 的办法一直是学术界研究的热点。阿霉素心肌损伤的机制可能 涉及了多个方面，包括氧化应激、细胞凋亡、基因及转录水平的 改变等l7 。免疫炎性损伤可能在阿霉素心肌损伤中发挥了重 要作用一 。本实验采用给大鼠一次性腹腔注射阿霉素15 mg／kg制备阿霉素急性心脏损伤模型_】。，并探讨芹菜素低(7．5 mg／kg)、中(15 mg／kg)、高(30 mg／kg)三个剂量对阿霉素急性 心脏损伤的影响。给予大鼠一次性腹腔注射阿霉素15 mg／kg 后，ADM 组的大鼠心肌细胞，出现心肌纤维的扭曲和断裂，而 且在血清CK—MB、心肌细胞TLR4免疫组化检测方面，ADR组与CONTROL组相比较，差异具有显著性，表明阿霉素急性 心脏损伤模型制作成功。而在提前给予5 d的芹菜素组，尤其 ADM+API(M)与ADM+API(H)组的各项指标均改善明显， 表明芹菜素可以减轻阿霉素所导致的心肌损伤。TLR4是近几 年发现可能参与许多心血管疾病的受体，Alexander等 发现 TLR4基因敲除鼠，其多柔比星所造成的心肌损伤减轻，而且束 进等 通过在体外心肌细胞培养损伤模型中发现，多柔比星作 用于乳鼠心肌细胞2 h、6 h后TLR4表达明显增加。本实验结 果亦显示，与CONTROL组相比较，ADR组的TLR4表达明显 增高；与ADR组相比较，ADR+API(M)与ADR+API(H)两 组TLR4的表达明显下降，提示阿霉素所导致的心脏损伤可能 与TLR4的过度表达有关。

芹菜素可减轻阿霉素性心肌损伤，可能与其对心肌细胞 TLR4表达的影响有关，但其确切机制还有待于深一步研究。