齐墩果酸(oleanolic acid)又名庆四素，是～ 种 五环三萜类化合物， 以游离或结合成苷的形式存在 于白花蛇舌草、山楂、丁香、大枣、女贞子、枇杷 叶、橡木、夏枯草等植物中⋯。现代研究表明齐墩 果酸具有护肝降酶、抗炎、强心利尿、抗肿瘤等作 用，其制剂除广泛应用于急、慢性肝炎的辅助治疗 以外，还可以配合肿瘤病人的手术、放疗、化疗， 促进病人免疫功能恢复121。许多中药及其制剂皆以 齐墩果酸为定量指标，本文对齐墩果酸的定量方法 作一综述。

 1 薄层分离一分光光度法

 董海丽等采用薄层分离 分光光度法测定木瓜 中齐墩果酸含量。准确称取5譬木瓜皮，30mL甲 醇， 回流萃取10 h，冷却后过滤，浓缩， 滤液置 于10mL容量瓶，定溶，制成样品溶液。移取20／．tL样 品溶液，在硅胶板上点样， 同时在硅胶板上点齐墩 果酸对照品溶液作为对照样，采用氯仿：丙酮(4：1)为 展开剂展开， 在对照品部位喷10％硫酸乙醇， 放 入105。C烘箱中烘10-15min显色。刮去紫红色部位相 对应的硅胶， 甲醇洗脱，置于10mL容量瓶，定溶。 在最大吸收波长210nm处测定吸光度值，计算样品中齐墩果酸的含量。

 采用薄层扫描法和高效液相色谱法测定， 需要薄层扫描仪和高效液相色谱仪等精密仪器； 而采 用分光光度法测定，杂质下扰较大，测定结果不准 确。如果先采用薄层色谱埘齐墩果酸进行分离，然 后用分光光度法进行测定，有效消除了杂质干扰， 方法简便，结果准确。

 2 高效液相色谱法

 2．1 HPLC—UV法

 姚荣成等14]采用HPLC—uV法测定女贞子 中齐墩果酸含量。色谱条件：LC一2010液相 色谱仪(日本岛津) ， 色谱柱：Phenomenex Luna C18柱(250mmx4．6mm，5／2m)； 流动相： 乙腈：0_4％磷酸溶液(80：20)； 检测波长：210 nm； 进样量：10yL， 流速：1 mL／min； 柱温：25。c。 精密吸取对照品溶液 (0。80g／L)0。2，0．5， t．0，2．0，5．0， 10．OpL进样， 记录色谱图。以峰面积积分值(Y)对进样量 (X)进行回归处理， 求回归方程。取5批样品的 粉末(过4号筛)各1 g，加入甲醇25mL，称定， 加热 回流提取1h，放冷，再称定，用甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，作为供试品溶液，分别测定。

 石心红等 测定齐墩果酸含量所用的色谱条 件：Agilent 1 100高效液相色谱系统，色谱柱：shim． Pack型C18(4．6ramx150mm) ， 流动相： 乙腈：甲 醇：水：乙酸胺(70：16：14：0．5)， 流速1mL／min，检测波 长：215nm。戚志华，赵蓉，江铁军等分别采 用HPLC对齐墩果酸测定，色谱条件与石心红所用条件基本相同。

 齐墩果酸分子中只有1个双键，紫外末端吸收。 当使用uV检测器时，流动相应尽量选用乙腈，减少 对测定的影响。在同时测定齐墩果酸和熊果酸含量 时，可适当加入一定量甲醇，使两种物质达到更好 的分离19]。另外加入少量磷酸[1o1， 乙酸胺⋯]等物质 可改变峰型。

 2．2 HPLC—ELSD法

 李会军等采用HPLC—ELSD法测定金银花 中齐墩果酸含量， 使用Alltima Cl8(4．6mmx250 mm，5／~m)色谱柱，柱温25。C， 乙腈：水(85：15)为流 动相， 以ELSD检测器检测，漂移管温度75。c，载气 流速1．9L／min，对金银花中齐墩果酸进行分离与测 定。

 ELSD检测器为质量型通用检测器，可检测任何 挥发性低于流动相的化合物，避免使用UV检测器时 溶剂的干扰。采用ELSD测定时，其峰面积值与对照 品浓度的线性关系不太理想，而将峰面积与对照品 浓度值分别取自然对数后可得到理想的线性关系， 这与ELSD检测器的检测机制是一致的[131。

 2．3 HPLC—MS法

 杨宜华等采用HPLC—MS法测定齐墩果酸的含量。色谱与质谱条件： 色谱 柱Hypersil ODS C18(150mmx4．6mm，5Jum)； 流 动相： 甲醇：0．05％ 冰醋酸(75：25)； 柱温45。C； 流 速0．2mL／min， 进样量5／／L。质谱大气压化学离 子化(APCI)探头，离子扫描确定选择离子流 (SIM) 为457， 正离子模式。APCI 400。C，CDL 250。C， BLOCK 250。C。

 采用HPLC—MS法， 其优势就在于进一步鉴定 峰， 除了利用色谱图的保留时间，还可根据质谱图 的荷质比，此方法是目前较先进的分析方法，应用也越来越多。

 3 气相色谱法

 闰花丽等以重氮甲烷为衍生化试剂，将齐墩果酸和熊果酸制成易气化的甲酯衍生物，然后采用 气相色谱法并以氢火焰检测器进行检测，对夏枯草 中的齐墩果酸和熊果酸进行了定量分析。重氮甲烷 与羧基的反应简单、快速、产率高，但重氮甲烷需 在实验室制备，且毒性大，活性高，易分解甚至爆 炸U61

 黄建林等H7]以BSTFA为衍生化试剂， 将齐墩果酸和熊果酸制成三甲基硅烷衍生物， 应用气 相色谱一质谱(GC MS)联用技术， 对番石榴叶 中的齐墩果酸和熊果酸进行了定性和定量分 析。色谱条件：HP 6890 GC／5973 MS气相色谱一 质谱联用仪，DB一5 MS弹性石英毛细管柱(30m ×0．25 mm，0．25#m) ， 进样口温度280。C， 高纯 氦气为载气， 流速1．0mL／min， 柱初温100。C， 恒 温保持2 min， 以10。C／min的速度升温至300。C，保 持14min，进样量1 L。EI电离源， 电子能量70eV， 扫描范围40~700#， 四级杆温度150。C， 离子源 温度230。C，GC—MS接口温度280。C。样品测定： 称取0．50g干燥的番石榴叶置于微波萃取罐中， 加10ml甲醇， 将密闭的萃取罐置于微波萃取仪 内，80。C加热10 min。待萃取罐冷却后， 过滤， 残渣用甲醇清洗2—3次， 合并滤液和洗涤液， 置 于10mL容量瓶，定溶。取20#L萃取液至2mL样品瓶 中， 用N2气吹干后，~n30#L BSTFA，盖紧盖子， 振摇0．5rain， 在70。C条件下加热30 min，进行衍生 化。取I#L进样， 测定齐墩果酸和熊果酸的峰面 积，计算番石榴叶中齐墩果酸和熊果酸的含量。

 气相色谱法测定齐墩果酸含量准确度较高，但 齐墩果酸分子中含有羟基和羧基，熔点3l0。CIl8]，挥 发性差，不能直接使用气相色谱进行测定，一般先 将其衍生，然后再测定。

 4 毛细管电泳法

 刘海兴等采用毛细管电泳法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸含量。色谱条件：Waters Quanta 400OE型毛细管电泳仪(Milford，MA，USA) ， 带有0．30kV电压， 阴极末端附近的固定波长紫外 检测器和恒温系统。毛细管(河北永年光导纤 维厂， 直径75／~m)总长60cm， 有效长度52cm。数 据处理由Waters Millennium 2010色谱管理软件完 成。以15mmol／L磷酸氢二钠、15 mmol／L硼砂、10 mmol／L十二烷基硫酸钠(SDS)、5％ (V，V )乙醇 的缓冲溶液作为运行电解质溶液，在20rain内实现了齐墩果酸和熊果酸的基线分离。

 肖美添等采用胶束毛细管电泳测定枇杷叶中 熊果酸和齐墩果酸的含量。主要条件：未涂层弹性 石英毛细管(75pmx60cm，有效长度50cm)；压力 进样，压力：3．0×103 Pa；进样时间：5s； 分离电 压：24 kV；柱温：25。C；检测波长：200 nm；运行 缓冲液：30 mmol／L SDS，20mmol／L羟丙基一 一环糊 精，5％乙腈，40 mmol／L硼砂溶液(pH=9．4)；运 行时间：30rain。

 张锋等[211采用毛细管电泳高频电导法测定夏 枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量。主要条件： 以布洛芬为内标， 采用毛细管区带电泳， 高 频电导检测； 未涂层弹性融硅石英毛细管柱55 cmx75#m ID，有效长度46 cm；1．2 mmol／L三乙胺一 HC1(pH=10．60) ， 一环糊精(0．08mmol／L) 为运 行缓冲液； 分离电压12．5kV； 重力进样10S (高 度20cm)。

 使用高效毛细管电泳法测定齐墩果酸含量具有 高效、高速、微量、操作简单和低耗的优点，近年 来在齐墩果酸分析方面逐渐得到重视。

 5 超临界流体色谱法

 吴玫涵等I2 采用超临界流体色谱法测 定怀牛膝及其制剂中齐墩果酸含量。色谱 条件：622型SFC／GC仪(美国理氏科学仪器公 司)；SP 6600型数据处理机； 色谱柱： 石英 毛细管交联柱(10mx50／．tm，ID) ； 固定相SB— Cyanopropyl一50： 液膜厚度：0．25pm~ 流动相：二氧化碳(99．995％ ) ； 柱温：9O。C； 检测 器：FID (325。C) ； 压力程序：l5．20 MPa保持7 min，然后以0．81 MPa／min升至20．26 MPa，再以1．22 MPa／min升至35．45 MPa。分流进样0．2／IL， 分流 比100：l； 补充气： 氮气。样品测定：精密称取怀 牛膝粉(20目，80。C F燥恒重)0．1g，加入2mol／L盐 酸20mL，超声振荡15min， 加热回流2 h，冷却后过 滤，弃去滤液。滤渣用蒸馏水洗至中性，烘干，加 氯仿20mL振摇，水浴回流1 h，趁热过滤，用少量氯 仿(2—3 mE)冲洗滤纸， 回收并挥干氯仿，备用。测定 前精密加入lmL二氯甲烷及lmL甲羟孕酮内标液，溶 解后进样测定。

 气相色谱测定齐墩果酸含量需要先衍生处理， 高效液相色谱不能和FID这种灵敏的检测器联用，超 临界流体色谱测定齐墩果酸含量克服了这些缺点， 具有方法简便、准确等优点。但超临界流体色谱并 不普及， 目前应用较少。

 6 讨论

 测定齐墩果酸含量的方法还有很多，例如：罗 海燕等l2 采用薄层扫描法测定亮舒片中齐墩果酸 含量， 肖巧清等124]采用旋光法测定齐墩果酸片的含 量，但由于这些方法定量准确度不高等特点，现在 使用较少。

 上述各种分析方法都有各自的优缺点，可根 据不同情况选择不同方法，但最为常用的是气相 色谱法和液相色谱法。一般而言，GC的检出限 L~,HPLC要高， 但齐墩果酸等物质熔沸点较高， 难挥发， 使用GC测定需要衍牛。HPLC有着分离 效能高、分析速度快及精准等特点，可对齐墩果酸等五环三萜类化合物的含量进行有效的分析测 定。HPLC~0定常用色谱条件为：反相Cl8柱，紫外 检测器，流动相以乙腈：水：磷酸=85：15：0．1％为主体， 可适当加入甲醇， 乙酸胺等物质，流速1mL／min，检 测波长210nm左右。