福建汇天生物药业有限公司生产的山楂精降脂片是以北山楂为原料，经醇提酸解得山楂提取物。再加适量辅料制成的纯中药制剂，主要有效成份有黄酮类的槲皮素、金丝桃甙、表儿茶精等，三萜酸类的熊果酸、山楂酸、齐墩果酸等。中华人民共和国卫生部药品标准第九册收载的山楂精降脂片质量标准，主要质量控制指标是以槲皮素作对照品，采用比色法测定总黄酮含量。但该方法存在专属性及准确性较差。不能很好地体现山楂精降脂片的质量控制。熊果酸的降脂、降压、抗心律失常等药理作用明确。公司参照高效相液法测定山楂中熊果酸含量的相关文献，通过反复试验，制订了可行的山楂精降脂片及山楂提取物的熊果酸含量的测定方法。为山楂精降脂片及其原料山楂提取物的质量控制和标准提高提供依据。

 l 仪器与试药

 1．1 仪器高效液相色谱仪，Lc10ATVP(日本岛津)；紫外分光光度计，uv一2401PC(日本岛津)；N2000型色谱工作站，浙江大学智能信息工程研究所。

 1．2 试药熊果酸。批号：110742—200516，中国药品生物制品检定所提供：山楂精提取物、山楂精降脂片。福建汇天生物药业有限公司提供；山楂精降脂片(060108批号)，宁夏启元药业有限公司生产；流动相用甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂和试药均为分析纯。

 2 方法与结果

 2．1 色谱条件色谱柱：Hypersil BDS Cl8(4．6X 250mm)：流动相：乙腈一甲醇一0．6％醋酸铵(68：12：20)；流速为1．0mL· min一1；灵敏度；0．01AUFS。

 2．2 溶液制备

 2．2．1 熊果酸对照品溶液制备：精密称取熊果酸对照品约10mg。用适量甲醇溶液溶解，置100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

 2．2．2 山楂精降脂片溶液制备：取成品10片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量(约平均片重的1．5倍)，置索氏提取器。于80．100℃ 水浴中，用甲醇回流提取3h，提取液置 50mL容量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，即得。

 2．2．3 山楂提取物溶液制备：精密称取山楂提取物约90mg，置索氏提取器，于80℃一100℃水浴中，用甲醇回流提取3h，提取液置50mL容量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，即得。

 2．2．4 阴性对照溶液制备：按山楂精降脂片处方比例配制 (山楂提取物除外)，称取适量，按山楂精降指片溶液制备方法制备。

 2．3 测定波长的选择取0．1mg·mLI1的熊果酸对照品溶液。以甲醇为空白，用紫外可见光扫描仪，于200～400nm波长范围内进行光谱扫描。从光谱图上可见熊果酸在210nm 处有最大吸收峰，因此选择210nm为检测波长。

 2．4 系统适用性试验分别取熊果酸对照品溶液、山楂提取物溶液、山楂精降脂片溶液、阴性对照溶夜各1O止，注入色谱仪。在上述条件下测定，记录各色谱图(见图1)。结果显示， 熊果酸对照品溶液、山楂提取物溶液、山楂精降脂片溶液的熊果酸峰保留时间分别为：15．748、15．432、15．382min基本一致；理论塔板数分别为：14187，13758，14010；山楂提取物及山楂精降脂片的熊果酸与其他相邻组分分离良好，分别为： 1．626、1．813；缺山楂提取物的阴性对照溶液在熊果酸位置处无色谱峰，说明山楂精降脂片处方中各辅料对熊果酸测定无影响。

 2．5 线性研究精密称取熊果酸对照品15．05mg。用甲醇溶液溶解，置50mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，得 0．30mg·mL-1对照品贮备液。精密量取上述贮备液1．4、 2．7,3．4、4、5mL分别置10mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度。摇匀，即得线性研究供试品溶液。量取上述供试品溶液各10pL，注入液相色谱仪，记录色谱图，记录主峰面积，以进样量( g)与峰面积作回归计算，得熊果酸线性回归方程：Y= 572485．1-2312．9X，r=0．9993，结果表明。熊果酸在0．422～ 1．505~g范围内。线性关系良好。

 2．6 精密度试验 取熊果酸对照品溶液10 ，注入液相色谱仪，记录色谱图及熊果酸峰面积，连续进样6次，RSD为 1．07％，表明本方法测定熊果酸精密度良好。

 2．7 稳定性试验

 2．7．1 山楂提取物稳定性试验：取批号为080104的山楂提取物约90mg，按山楂提取物溶液制备方法制备，分别于0、3、 6．9、12、24h取样品10 L，注入液相色谱仪，记录色谱图及熊果酸峰面积，RSD为1．76％。表明样品在24h内基本稳定。

 2．7．2 山楂精降脂片稳定性试验：取批号为080102的成品山楂精降脂片l0片，按山楂精降脂片溶液制备方法制备．分别于0、3、6、9、12、24h取样品1O L，注入液相色谱仪，记录色谱图及熊果酸峰面积，RSD为1．31％，表明样品在24h内基本稳定。

 2。8 重复性试验

 2．8．1 山楂提取物重复性试验：取山楂提取物(批号 070802)，按山楂提取物溶液制备方法制备6份。各取样品 1O止，注入液相色谱仪，记录色谱图及熊果酸峰面积，结果平均含量为47．27 g·mg～ ，RSD 为1．78％。表明此方法重复性良好。

 2．8．2 山楂精降脂片稳定性试验：取成品山楂精降脂片(批号070702)，按山楂精降脂片溶液制备方法制备6份，各取样品10 L，注入液相色谱仪，记录色谱图及熊果酸峰面积，结果平均含量为21．40 g·mg一。RSD为1．67％。表明此方法重复性良好。

 2．9 加样回收试验

 2．9．1 山楂提取物加样回收试验：取山楂提取物(批号 080104，熊果酸含量5．0％)，精密称取约90mg，同时加入熊果酸3．28mg(精密称取熊果酸对照品20．52mg，用甲醇定容于25mL容量瓶中，每份供试品中加入4mL，即3．28mg)，按山楂提取物溶液制备方法进行制备，重复制备6份，各取样品 1O止，注入液相色谱仪，记录色谱图及熊果酸峰面积，并计算回收率。结果(见表1)。表明此方法测定山楂提取物熊果酸含量。熊果酸基本没有损失。

 2．9．2 山楂精降脂片加样回收试验：取成品山楂精降脂片 (批号080102，熊果酸含量4．00rag／片)，精密称取约平均片重的1．5倍量，置索氏提取器，精密加入熊果酸2．71mg后 (精密称取熊果酸对照品22．60mg。用甲醇定容于25mL容量瓶中，每份供试品中加入3mL，即2．71mg)，按山楂精降脂片溶液制备方法制备，重复制备6份，各取样品lO~tL。注入液相色谱仪，记录色谱图及熊果酸峰面积，并计算回收率，结果表明此方法测定山楂精降脂片熊果酸含量。熊果酸基本没有损失。

 2．10 含量测定

 2．10．1 山楂提取物含量测定：取不同生产日期的山楂提取物l0批，测定熊果酸含量，结果(见表3)。

 2．10．2 山楂精降脂片含量测定：取10批不同生产批号山楂精降脂片，以及宁夏启元药业有限公司生产的批号为060108 的山楂精降脂片测定熊果酸含量。

 3 讨论

 3．1 指标成分的选择以槲皮素作对照品，采用比色法测定总黄酮含量，山楂精降脂片的总黄酮含量在4．5mg／片以上，山楂提取物的总黄酮含量在8．0％以上；根据文献报道山楂黄酮类物质主要有槲皮素、金丝桃苷、牡荆素等，我们根据文献报道的液相色谱含量测定方法，结果山楂精降脂片中的槲皮素、金丝桃苷、牡荆素的含量都很低、分离度不好，不适合做为质量控制指标；熊果酸作为山楂中三萜酸类主要成分，药理作用明确，液相色谱法测定含量的文献报道也比较多。经过试验我们认为采用熊果酸作为山楂精降脂片及其原料山楂提取物质量控制指标是比较科学的。

 3．2 色谱条件的选择根据文献报道。我们试验了不同色谱柱和不同流动相，试验结果表明，黄秋妹、李宗在 (HPLC法测定山楂中熊果酸和齐墩果酸的含量>一文中报道的色谱柱为Hypersil BDS C18(4．6×250mm)、乙腈一甲醇一 0．5％醋酸铵(67：12：21)为流动相的色谱条件的熊果酸的分离效果较好，在此方法基础上我们对流动相进行优化，最终确定为乙腈一甲醇一0．6％醋酸铵(68：12：20)。

 3．3 不同生产单位山楂精降脂片熊果酸含量的差异我们对比了宁夏启元药业有限公司生产的山楂精降脂片的熊果酸含量。其含量为2．85mg／片，与丁建宝[7 等报道的2．58mg／片的熊果酸含量水平基本一致；福建汇天生物药业有限公司的 3．68／片的熊果酸含量水平，要比其高近30％。

 3．4 本方法测定山楂精降脂片及山楂提取物中熊果酸含量，具有分离效果好、灵敏度高、准确性好、操作简单等优点，可做为山楂精降脂片质量标准提高的试验依据。