摘　要:本文进行了超声法提取厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的研究，研究结果表明：用超声强度中等、酒精度100％、提取时间为24h以及料液比1：40的提取条件可很好地提取厚朴药材中的厚朴酚及和厚朴酚。厚朴酚、和厚朴酚以及总酚的提取率分别为95．45％、79．46％和89．57％。RP—HPLC方法较好，结果理想.

 关键词:厚朴酚 和厚朴酚 超声法 RP-HPLC 含量  厚朴提取物  上禾生物  www.staherb.com    

 厚朴为木兰科植物厚朴(Magnolia offci,~lis Rend et Wils)的干皮、根皮或枝皮，性温味苦辛，无毒，人脾、胃、大肠经，能温中下气，燥湿消痰。厚朴 在我国已有两千多年药用历史，用于治疗多个系统和器官的疾病，现代药理学研究表明，厚朴具有抗 菌、抗病毒、抗过敏、影响胃肠活动、肌肉松弛和中枢抑制等作用.

 厚朴药材中含酚性化合物9种，挥发油成分30 种，生物碱9种以及其它一些化学成分。其中，厚朴酚及其异构体和朴酚占绝对优势，这两种酚也是 起厚朴中起主要药理作用的化合物。目前有很多提取这二种化合物的方法(工艺)的文献报道，尚没 有用超声法提取厚朴酚以及和厚朴酚的报道。

 本研究利用正交试验，进行了超声法提取厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的研究，结果理想，报告如下。

 1 材料与方法

 1．1 材料与试剂

 厚朴皮取自湖北恩施市双河乡，为紫油厚朴的干燥发汗树皮。提取用无水乙醇、 甲醇为分析纯，HPLC甲醇为色谱纯，厚朴酚、和厚朴酚标准品由中国药品生物制品检定所提供。

 1．2 仪器

 JY96一Ⅱ超声波细胞粉碎机；美国DI— ONEX公司P680LPG型高效液相色谱仪；RE一52型 旋转蒸发仪。

 1．3 方法

 1．3．1 厚朴皮中酚类物质的全提取：取干燥的发 汗厚朴皮，粉碎，过60目筛，取适量用无水乙醇于索 氏抽提器中提取至无色为止；用旋转蒸发仪浓缩后 定容，取样用甲醇稀释l0倍后进行HPLC测定含 量，三次重复。

 1．3．2 厚朴皮中酚类物质的超声提取：采用正交 实验L。(3 )进行超声提取厚朴药材中厚朴酚及和 厚朴酚方的研究，正交实验的因素水平表见表1；提 取过程中进行磁力搅拌，提取结束后过滤、3次淋洗、浓缩及定容取样，用甲醇稀释后进行HPLC测定 含量。

 表1 因素水平表

 1．3．3 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：C (250mm×4．6 mm，5 m)，流动相：甲醇一水一冰醋酸 (85：15：0．25)，流速：1．0 ml／min，检测波长：294 nm，柱温：23℃ ，进样量：20 l。

 1．3．4 线性范围考察：精密称取厚朴酚、和厚朴酚 对照品适量，加甲醇制成每1 ml含厚朴酚以及和厚 朴酚均为400，200，100，50，25，12．5，6．25 IJ,g的标 准品浓度梯度，分别吸取溶液20 l，注入HPLC仪 测定。以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。

 1．3．5 精密度试验：取厚朴酚以及和厚朴酚浓度 为100 IJ,g／ml的对照品溶液，重复进样6次，记录色 谱峰面积，计算RSD。

 1．3．6 重复性试验：取索氏提取的一个样品，依法 平行测定5次，记录厚朴酚与和厚朴酚的色谱峰面 积，计算RSD。

 1．3．7 稳定性试验：取索氏提取的一个样品，每隔 2 h进样1次，共进样5次，考察供试品溶液的稳定 性。

 1．3．8 回收率试验：取已测知含量的样品5份，分 别精密加入对照品适量，依RP—HPLC法测定，计算 回收率。

 2 结果

 2．1 HPLC结果及标准品线性关系

 在前述色谱条件下，厚朴酚与和厚朴酚与其他成分能够很好地 分离；以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。厚朴酚浓度在6．25 ～ 400 Ixg／ml和厚朴酚浓度在6．25—400 Ixg／ml范围内与峰面积线性关系良好。回归方程为：厚朴酚 Y：0．435991X+3．423161，R：0．999694；和厚朴酚 Y ：0．609061X +4．516839，R：0．999526。

 2．2 超声提取正交实验结果

 见表2。各因素对 和厚朴酚提取的重要性为C>A>D>B，对厚朴酚 提取的重要性为A>C>D>B，对总酚提取的重要 性为C>A>D>B；综合考虑，超声提的最优方法为：超声强度中等，酒精度100％ ，提取时间为24 h， 料液比l：40。

 2．3 优选提取方法的验证

 采用上述最优方法提取3次，厚朴酚、和厚朴酚以及总酚的提取率分别为 95．45％、79．46％和89．57％，表明本方法的提取效 果较好。

 2．4 精密度试验结果

 取厚朴酚以及和厚朴酚浓 度为100 g／ml的对照品溶液，重复进样6次，记录 色谱峰面积，计算得厚朴酚与和厚朴酚的RSD分别 为0．7l％ ，1．16％ 。

 2．5 重复性试验

 取索氏提取的一个样品，依法平行测定5次，记录厚朴酚与和厚朴酚的色谱峰面积，计算得厚朴酚与和厚朴酚的RSD分别为 0．91％ ，1．23％ 。

 2．6 稳定性试验

 取索氏提取的一个样品，每隔2 h进样1次，共进样5次，结果供试品溶液在10 h内 稳定，厚朴酚与和厚朴酚的RSD分别为1．07％， 1．32％ 。

 2．7 回收率试验

 取已测知含量的样品5份，分 别精密加入对照品适量，依RP—HPLC法测定，结果 和厚朴酚的平均回收率为99．69％，RSD为I．2l％； 厚朴酚的平均回收率为100．63％ ，RSD为1．37％；本研究的RP—HPLC测定法的回收率较好，方法是可行的。

 超声提取正交实验结果

 3 讨论

 3．1 厚朴是一种应用较广的重要中药材，最近的 研究表明，其中厚朴酚 与和厚朴酚 有抑制癌细 胞的潜能，厚朴药材将会有更加广泛的医药用途；本文首次报道了用超声法提取厚朴药材中的厚朴酚与 和厚朴酚的研究，超声有助于厚朴酚与和厚朴酚的提取，适用于工业化生产的放大工艺正在进一步研 究中。

 3．2 笔者考察了十多种测定厚朴皮的RP．HPLC 条件(结果另文报道)，以本文报道的色谱条件最 优，比药典2005年版介绍的方法理想；不仅分离效 果、重复性、稳定性等指标理想，而且省时经济，测定 一个样品只需l3～15 min，药典2005年版介绍的方 法则需要近35 min

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