Hup A 在蛇足石杉等石杉科植物中含量极低，为分离、纯化得到较高产率的 Hup A，研究人员正努力探索、寻找理想的分离方法，并对检测方法进行了大量研究．

1 HupA 的提取及分离

石杉生物碱的提取可分为酸水溶液提取法和有机溶剂提取法．常见的提取方法有酒石酸浸泡、盐酸渗漏、Soxhlet 抽提以及乙醇回流提取等。

张秀尧等用乙醇渗漏、减压浓缩，残留液加水，去沉淀，水液减压浓缩，经氧化铝柱多次层析，TLC 制备分离，丙酮-甲醇、丙酮重结晶，得到 8 个生物碱结晶并鉴定了Serratine (Ⅰ)、Serratinine (Ⅱ)和Lycodoline(Ⅲ)3个成分的结构．沈生荣等用酒石酸浸提、萃取、脱色和重结晶等提取分离技术从蛇足石杉中提取分离制得 HupA 单体．孙远明等分别利用甲醇 Soxhlet 抽提法、乙醇 Soxhlet 抽提法、氯仿 Soxhlet 抽提法及稀盐酸水浸提法对比提取 HupA，发现氯仿 Soxhlet 抽提法 HupA 得率最高，为 0.019 6%．袁珊琴等用 2%盐酸浸提蛇足石杉生药粉，滤液以阳离子交换树脂进行初步分离，所得总生物碱用硅胶 G 柱层析低压分离，乙醇-冰醋酸(体积比100∶  7 )为洗脱剂，所得 5 个组成部分利用制备型薄层层析，以甲醇-石油醚、石油醚、丙酮-石油醚、无水乙醇-丙酮萃取重结晶，得到了石松生物碱的不同单体．查圣华等利用微波协助提取 HupA，发现微波协助提取比传统提取方法时间短、操作简便、成本低、杂质少、回收率高，是一种较为理想的提取方法．查圣华利用超声提取蛇足石杉中的HupA，与传统回流法相比，时间由 2 h 缩短到 15 min，且回收率更高，是一种比较理想的提取方法．许慧等用柠檬酸、酒石酸、醋酸、磷酸、盐酸 5 种酸水溶液，冷浸样品 20 h，过滤浓缩，氨水调 pH 至 9，氯仿萃取，浓缩至干，甲醇定容到至 10 mL．HPLC 分析后发现 HupA用不同酸水溶液提取，所得回收率在同一水平，从成本核算以及实验的可操作性，采用盐酸提取更为合理．许慧等用 1.0%盐酸冷浸、渗漏、超声、甲醇热回流 4 种方法制备 HupA，发现甲醇热回流和超声所得 HupA 的回收率较高，但产品纯度较低，给后续分离纯化带来困难；1.0%盐酸水渗漏和冷浸的产品纯度较高，渗漏的回收率高于冷浸．刘嘉森等用 95%乙醇提取出蛇足石杉全草中的生物碱，以稀氢氧化钠溶液萃取，得到酚性生物碱经碱性硅胶柱层析，以不同体积比的氯仿-甲醇(98∶ 2 、97∶ 3 、96∶ 4 )洗脱，各流份进行薄层层析检测，展开剂为氯仿-丙酮-甲醇(体积比50∶ 4 5∶ 5 )，单一成分回收，蒸干后加丙酮，重结晶，得到 HupA 单体。

HupA 提取、分离一般采用酸溶液浸提和醇溶液浸提，酸提法以盐酸浸提为首选，有机溶剂以氯仿效果较佳．用微波协助提取、超声提取优于传统回流提取法．研究不同溶剂浸提的方法及辅助浸提手段获得高回收率、高纯度的产品是 HupA 提取研究的方向．

2 HupA 的检测方法

2.1 紫外扫描法

HupA ((5 R，9 R，11 E)-5-氨基-11-亚乙基-5，6，9，10-四氢-7-甲基-5，9-亚甲环芳辛并-2(1H) 吡啶酮，分子式为 C15H18N2O，分子量为242.32．HupA 与其他生物碱有部分相同的物理性质，可采用经典生物碱提取方法进行提取，但其独特的空间环和酰氨基使它具有与一般生物碱不同的特点，用一般的生物碱染色方法不能使其染色，但可以用酸性乙醇-FeCl3染色，使其呈黄绿色，并可利用该性质进行紫外扫描测定其含量．

由于 HupA 具有邻位双取代的 a-吡啶酮环和孤立双键，紫外吸收光谱图的最大吸收峰分别位于204、231、311 nm 左右，考虑到溶剂的紫外吸收截止波长，204 nm 作为检测波长不合适，在 23l nm近紫外区干扰较多，一般选择 311 nm 左右为紫外分析时 HupA 的检测波长。

2.2 高效液相色谱法

高效液相色谱法(HPLC)是目前检测 HupA 灵敏度很高的一种方法。HPLC 法检测 HupA 的色谱条件分离柱一般选用 C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相以甲醇、乙腈为有机相，磷酸二氢钠溶液(磷酸二氢钾溶液)、醋酸铵溶液为水相等按不同比例配比，检测波长选用 310 nm左右，可得到良好的分析结果．