大黄素提高胰腺癌细胞化疗敏感性的机制研究 | 大黄素提高胰腺癌细胞化疗敏感性的机制研究 |
| 发布时间:2012-10-18 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2116 |
【摘要】 目的 探讨大黄素能否提高胰腺癌细胞化疗敏感性及其作用机制。方法 设立对照组（正 常人皮肤成纤维细胞／胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞），顺铂组（５ｍｇ／Ｌ），吉西他滨组（０．５μｍｏｌ／Ｌ），大黄素与顺铂联合组（５０μｍｏｌ／Ｌ、５ｍｇ／Ｌ），大黄素与吉西他滨联合组（５０μｍｏｌ／Ｌ、０．５μｍｏｌ／Ｌ）。应用ＭＴＴ法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，ＲＴＰＣＲ法检测不同细胞株中多药耐药相关蛋白１（ＭＲＰ１）、多药耐药相关蛋白２（ＭＲＰ２）、乳腺癌耐药蛋白（ＢＣＲＰ）和Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）ｍＲＮＡ的表达。采用ｔ检验比较两组差 异。结果 顺铂组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的存活率和凋亡率分别为６２．４４％ ±３．４２％和２７．１０％ ±４．２４％，大黄素与顺铂联合组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的存活率和凋亡率分别为３０．５３％ ±０．０５％和６６．３３％ ±９．３７％，两组比较，差异有统计学意义（ｔ＝１３．２０，５．３５，Ｐ＜０．０５）。吉西他滨组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的存活率和凋亡率分别为７９．８２％ ±２．８３％和１３．４８％ ±１．６５％，大黄素与吉西他滨联合组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的存活率和凋亡率分别为４５．６５％ ±２．４６％和６２．７４％ ±１０．１８％，两组比较，差异有统计学意义（ｔ＝１２．８９，８．２８，Ｐ＜０．０５）。顺铂组和大黄素与顺铂联合组正常人皮肤成纤维细胞存活率比较，差异无统计学意义（ｔ＝２．０８，Ｐ＞０．０５）。吉西他滨组和大黄素与吉西他滨联合组正常人皮肤成纤维细胞存活率比较，差异无统计学意义（ｔ＝０．６４，Ｐ＞０．０５）。在胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞中，只能检测到ＭＲＰ１ｍＲＮＡ的表达，未能检测到ＭＲＰ２、ＢＣＲＰ、ＰｇｐｍＲＮＡ的表达。顺铂组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的ＭＲＰ１ｍＲＮＡ表达水平显著降低，而大黄素与顺铂联合组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的ＭＲＰ１ｍＲＮＡ表达水平则进一步下调。结论 大黄素能够提高胰腺癌细胞对顺铂的敏感性，其机制与下调的ＭＲＰ１ｍＲＮＡ表达有关。 【关键词】 胰腺肿瘤； 大黄素； 上禾生物 大黄提取物 多药耐药； 化疗； ＢＸＰＣ３细胞株 Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆｅｍｏｄｉｎｅｎｈａｎｃｉｎｇｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ ＷＡＮＧＷｅｉ，ＳＵＮＹｕｅｐｉｎｇ， ＹＩＪｉｎｇ，ＷＡＮＧＪｉａｎ． ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ＲｅｎｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００１２７，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＷＡＮＧＪｉａｎ，Ｅｍａｉｌ：ｄｒ＿ｗａｎｇｊｉａｎ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｗｈｅｔｈｅｒｅｍｏｄｉｎｅｎｈａｎｃｅｓｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＮｏｒｍａｌｈｕｍａｎｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓａｎｄｐａｎｃｒｅａｔｉｃＢＸＰＣ３ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｃｉｓｐｌａｔｉｎ（５ｍｇ／Ｌ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ，ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ（０．５μｍｏｌ／Ｌ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ，ｅｍｏｄｉｎ（５０μｍｏｌ／Ｌ）＋ｃｉｓｐｌａｔｉｎ（５ｍｇ／Ｌ）ｃｏｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐａｎｄｅｍｏｄｉｎ（５０μｍｏｌ／Ｌ） ＋ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ（０．５μｍｏｌ／Ｌ）ｃｏｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．ＴｈｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ，ｔｈｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ１（ＭＲＰ１），ＭＲＰ２，ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ（ＢＣＲＰ）ａｎｄＰｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ（Ｐｇｐ）ｍＲＮＡｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｅｌｌｌｉｎｅｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ．Ａｌｌｄａｔａｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅｔｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴｈｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃＢＸＰＣ３ｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｅｒｅ６２．４４％ ±３．４２％ ａｎｄ２７．１０％ ±４．２４％ ｉｎｔｈｅｃｉｓｐｌａｔｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ，ａｎｄｔｈｅｙｗｅｒｅ３０．５３％ ±０．０５％ ａｎｄ６６．３３％ ±９．３７％ ｉｎｔｈｅｅｍｏｄｉｎ＋ｃｉｓｐｌａｔｉｎｃｏｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ（ｔ＝１３．２０，５．３５，Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃＢＸＰＣ３ｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｅｒｅ７９．８２％ ±２．８３％ ａｎｄ１３．４８％ ±１．６５％ｉｎｔｈｅｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ，ａｎｄｔｈｅｙｗｅｒｅ４５．６５％±２．４６％ ａｎｄ６２．７４％±１０．１８％ｉｎｔｈｅｅｍｏｄｉｎ＋ ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅｃｏｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．ＴｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｂｅｔｗｅｅｎＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３９７５２．２０１０．０５．０１２ 基金项目：上海市卫生局资助基金（２００７０４９） ｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ（ｔ＝１２．８９，８．２８，Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｎｏｒｍａｌｈｕｍａｎ ｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｃｉｓｐｌａｔｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｅｍｏｄｉｎ＋ ｃｉｓｐｌａｔｉｎｃｏｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ，ａｎｄａｌｓｏｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｅｍｏｄｉｎ＋ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅｃｏｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ（ｔ＝２．０８，０．６４，Ｐ＞０．０５）．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＲＰ１ｍＲＮＡｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃＢＸＰＣ３ｃｅｌｌｓ，ｗｈｅｒｅａｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＲＰ２， ＢＣＲＰａｎｄＰｇｐｍＲＮＡｗａｓｕｎｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＲＰ１ｍＲＮＡｉｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃＢＸＰＣ３ｃｅｌｌｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉ ｃａｎｔｌｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｔｈｅｃｉｓｐｌａｔｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ，ａｎｄｃｉｓｐｌａｔｉｎ＋ｅｍｏｄｉｎｃｏｔｒｅａｔｍｅｎｔｈａｄａｎａｄｄｉｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｎｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＲＰ１ｍＲＮＡ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＥｍｏｄｉｎｍａｙｅｎｈａｎｃｅｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎｂｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＲＰ１ｍＲＮＡ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｎｅｏｐｌａｓｍｓ； Ｅｍｏｄｉｎ； Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ； Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ； ＢＸＰＣ３ｃｅｌｌｓ 胰腺癌是一种较常见的恶性肿瘤，预后差。高度耐药是它的重要特征［１］。而肿瘤细胞过表达ＡＢＣ转运体是引起肿瘤细胞耐药的主要原因。近年来，许多针对ＡＢＣ转运体的化疗增敏剂已应用于逆转或减轻肿瘤的多药耐药［２－４］。大黄素是富含于传统中草药内的一种天然蒽醌成分，能够通过抑制ＡＢＣ转运体Ｐ糖蛋白（Ｐｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐｇｐ）的表达，提高前列腺癌细胞株ＤＵ１４５对顺铂的敏感性［５］。本研究旨在探讨大黄素是否能提高胰腺癌细胞对化疗药的敏感性及其作用机制。 １ 材料与方法 １．１ 细胞和试剂 人胰腺癌细胞株ＢＸＰＣ３和人胆囊癌细胞株ＳＧＣ９９６购自中国科学院上海细胞库。正常人皮肤成纤维细胞、胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１和前列腺癌细胞株ＤＵ１４５由上海交通大学医学院细胞生物学教研室提供。细胞用含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养基 和ＲＰＭＩ１６４０培养基，置于５％ ＣＯ２、３７℃条件下培养传代。药物试剂：顺铂购自江苏豪森药业股份有限公司，吉西他滨购自法国Ｌｉｌｌｙ公司，大黄素购自美国Ｓｉｇｍａ公司。 １．２ ＭＴＴ法检测胰腺癌细胞和正常人皮肤成纤维细胞存活率 将经消化的细胞按１×１０４／孔接种于９６孔板，培养过夜，待细胞贴壁后加药处理。设立５组：对照组（正常人皮肤成纤维细胞／胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞）、顺铂组、吉西他滨组、大黄素与顺铂联合组、大黄素与吉西他滨联合组。每组设３个重复孔。顺铂、吉西他滨、大黄素终浓度分别为５ｍｇ／Ｌ、０．５μｍｏｌ／Ｌ和５０μｍｏｌ／Ｌ。培养２４ｈ后每孔加入１００μｇＭＴＴ，孵育４ｈ，加１００μｌＤＭＳＯ，振荡后用酶标仪测Ａ值。用药组Ａ４９０值与对照组Ａ４９０值的比值×１００％为细胞存活率。 １．３ 流式细胞仪检测胰腺癌细胞凋亡率分组及加药浓度同ＭＴＴ法。细胞用药物处理２４ｈ后，收集细胞制成单细胞悬液，按试剂盒（美国ＢＤ公司）说明书进行ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ／ＰＩ荧光染色，用流式细胞仪检测细胞凋亡率。 １．４ ＲＴＰＣＲ检测不同细胞株中多药耐药蛋白ｍＲＮＡ的表达 提取细胞总ＲＮＡ，取２μｇＲＮＡ逆转录合成ｃＤＮＡ链，并以１μｌｃＤＮＡ作为模板，进行ＲＴＰＣＲ。该反应所用引物分别为：（１）多药耐药相关蛋白１（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ１，ＭＲＰ１）引物：５′ＴＧＧＴＧＧＧＣＣＴＣＴＣＡＧＴＧＴＣＴＴＡ３′，５′ＴＣＧＧ ＴＡＧＣＧＣＡＧＧＣＡＧＴＡＧＴＴＣ３′；（２）多药耐药相关蛋白２（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ２，ＭＲＰ２） 引物：５′ＡＴＧＣＴＴＣＣＴＧＧＧＧＡＴＡＡＴ３′，５′ＴＣＡＡＡＧ ＧＣＡＣＧＧＡＴＡＡＣＴ３′；（３）乳腺癌耐药蛋白（ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＢＣＲＰ）引物：５′ＴＧＧＣＴＧＴ ＣＡＴＧＧＣＴＴＣＡＧＴＡ３′， ５′ＧＣＣＡＣＧＴＧＡＴＴＣＴＴＣＣＡ ＣＡＡ３′；（４）Ｐｇｐ引物：５′ＣＣＣＡＴＣＡＴＴＧＣＡＡＴＡＧ ＣＡＧＧ３′，５′ＧＴＴＣＡＡＡＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＡ３′。反应结 束后取适量ＰＣＲ扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，ＧＡＰＤＨ作为内参照。胆囊癌细胞株ＳＧＣ９９６、胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１、前列腺癌细胞株ＤＵ１４５作为阳性对照。 １．５ ＲＴＰＣＲ检测不同因素处理下胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞中ＭＲＰ１ｍＲＮＡ的表达设立３组：对照组、顺铂组、大黄素与顺铂联合组。加药浓度同ＭＴＴ法。细胞用药物处理２４ｈ后，将细胞消化后提取ＲＮＡ，进行ＲＴＰＣＲ检测。 １．６ 统计学分析 应用ＳＰＳＳ１５．０统计软件进行分析，计量资料以珋ｘ±ｓ表示，两组之间比较采用ｔ检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２ 结果 ２．１ 各组中胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞和正常人皮肤成纤维细胞的存活率ＭＴＴ检测结果显示，顺铂组和大黄素与顺铂联 合组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的存活率分别为６２．４４％ ±３．４２％和３０．５３％ ±０．０５％，其差异有统计学意义（ｔ＝１３．２０，Ｐ＜０．０５）。吉西他滨组和大黄素与吉西他滨联合组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的存活率分别为７９．８２％ ±２．８３％和４５．６５％ ±２．４６％，其差异有统计学意义（ｔ＝１２．８９，Ｐ＜０．０５）。见图１。顺铂组和大黄素与顺铂联合组正常人皮肤成纤维细胞存活率比较，差异无统计学意义（ｔ＝２．０８，Ｐ＞０．０５）。吉西他滨组和大黄素与吉西他滨联合组正常人皮肤成 纤维细胞存活率比较，差异无统计学意义（ｔ＝０．６４，Ｐ＞０．０５）。见图２。 １：对照组；２：顺铂组；３：大黄素与顺铂联合组；４：吉西他滨组；５：大黄素与吉西他滨联合组；ａ与顺铂组比较，Ｐ＜０．０５；ｂ与吉西他滨组比较，Ｐ＜０．０５ 图１ 胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的存活率 １：对照组；２：顺铂组；３：大黄素与顺铂联合组；４：吉西他滨组； ５：大黄素与吉西他滨联合组；ａ与顺铂组比较，Ｐ＞０．０５；ｂ与吉西他滨组比较，Ｐ＞０．０５ 图２ 正常人皮肤成纤维细胞的存活率 ２．２ 各组中胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的凋亡率 流式细胞仪检测结果显示，顺铂组和大黄素与顺铂联合组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的凋亡率分别为２７．１０％ ±４．２４％和６６．３３％ ±９．３７％，其差异有统 计学意义（ｔ＝５．３５，Ｐ＜０．０５）。吉西他滨组和大黄素与吉西他滨联合组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞凋亡率分别为１３．４８％ ±１．６５％和６２．７４％ ±１０．１％，其差异有统计学意义（ｔ＝８．２８，Ｐ＜０．０５）。见图３。 ２．３ 各细胞株中多药耐药蛋白ｍＲＮＡ的表达 ＲＴＰＣＲ检测结果显示，ＭＲＰ１、ＭＲＰ２、ＢＣＲＰｍＲＮＡ的表达在对照细胞株ＳＧＣ７９０１、ＳＧＣ９９６、ＤＵ１４５中均能检测到，而ＰｇｐｍＲＮＡ的表达在对照细胞株ＤＵ１４５中能检测到。但是，同样条件下在胰腺癌细胞株ＢＸＰＣ３中，只能检测到ＭＲＰ１ｍＲＮＡ的表达，未能检测到ＭＲＰ２、ＢＣＲＰ、ＰｇｐｍＲＮＡ的表达（图４）。 １：对照组；２：顺铂组；３：大黄素与顺铂联合组；４：吉西他滨组； ５：大黄素与吉西他滨联合组；ａ与顺铂组比较，Ｐ＜０．０５；ｂ与吉西他滨组比较，Ｐ＜０．０５ 图３ 胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的凋亡率 ＭＲＰ１：多药耐药相关蛋白１；ＭＲＰ２：多药耐药相关蛋白２；ＢＣＲＰ：乳腺癌耐药蛋白；Ｐｇｐ：Ｐ糖蛋白图４ ＭＲＰ１、ＭＲＰ２、ＢＣＲＰ、ＰｇｐｍＲＮＡ在ＳＧＣ７９０１、ＢＸＰＣ３、ＳＧＣ９９６、ＤＵ１４５细胞中的表达水平 ２．４ 顺铂组和大黄素与顺铂联合组中胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的ＭＲＰ１ｍＲＮＡ的表达ＲＴＰＣＲ检测结果显示，顺铂组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的ＭＲＰ１ｍＲＮＡ表达水平显著降低，而大黄素与顺铂联合组胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的ＭＲＰ１ｍＲＮＡ表达水平则进一步下调（图５）。 １：对照组；２：顺铂组；３：大黄素与顺铂联合组；ＭＲＰ１：多药耐药相关蛋白１ 图５ ＭＲＰ１ｍＲＮＡ在胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞中的表达水平 ３ 讨论 我们在临床治疗过程中发现，耐药是治疗胰腺癌的主要障碍。胰腺癌以高度的天然性或获得性耐药为特征［１］。有研究结果显示，大黄素能够提高ＨｅＬａ细胞、食道癌细胞对砷剂的敏感性［６－８］。同时，大黄素还能通过抑制ＡＢＣ转运体Ｐｇｐ的表达，提高前列腺癌细胞对顺铂的敏感性［５］。我们的研究结果显示，与单用化疗药比较，大黄素与顺铂或吉 西他滨联合应用能够进一步降低胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的存活率，使该肿瘤细胞的凋亡率进一步增加。这表明大黄素可以明显提高胰腺癌细胞的化疗敏感性。与单用化疗药比较，大黄素与顺铂或吉西他滨联合应用对正常人皮肤成纤维细胞存活率无显著影响。这表明大黄素提高化疗药对细胞的毒性作用在肿瘤与非肿瘤细胞间具有一定的选择性。 以往的研究结果显示，造成肿瘤耐药的原因之 一在于肿瘤细胞过表达ＡＢＣ转运体，这些转运体会增加药物泵出，从而减少细胞内药物积累［２－４］。在与肿瘤耐药有关的ＡＢＣ转运体中，以ＭＲＰ１、ＭＲＰ２、ＢＣＲＰ、Ｐｇｐ最为重要［２］。为此，我们检测了上述ＡＢＣ转运体在胰腺癌细胞株ＢＸＰＣ３中的表达水平。本研究结果显示，在胰腺癌细胞株ＢＸＰＣ３中未能检测到ＭＲＰ２、ＢＣＲＰ、ＰｇｐｍＲＮＡ的表达，只能检测到ＭＲＰ１ｍＲＮＡ的表达。但是，ＭＲＰ２、ＢＣＲＰｍＲＮＡ的表达在对照细胞株ＳＧＣ７９０１、ＳＧＣ９９６、ＤＵ１４５中均能检测到，ＰｇｐｍＲＮＡ的表达在对照细胞株ＤＵ１４５中能检测到。这说明在细胞株ＢＸＰＣ３中ＭＲＰ２、ＢＣＲＰ、ＰｇｐｍＲＮＡ是低表达或不表达的，而ＭＲＰ１ ｍＲＮＡ是相对高表达的。因此，ＭＲＰ１可能在胰腺癌细胞株ＢＸＰＣ３的耐药过程中发挥重要作用，而ＭＲＰ２、ＢＣＲＰ、Ｐｇｐ与ＢＸＰＣ３细胞的耐药无相关性。 本研究结果表明，单用顺铂可以显著降低胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的ＭＲＰ１ｍＲＮＡ表达水平，大黄素与顺铂联合应用则能进一步下调胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的ＭＲＰ１ｍＲＮＡ表达水平。ＭＲＰ１的高表达会增加化疗药物泵出，从而降低细胞内化疗药物的浓度。 ＭＲＰ１的底物主要包括天然细胞毒药物，如蒽环类、表鬼臼毒素和长春花生物碱类以及一些重金属类（包括顺铂）［４，９］。进入肿瘤细胞的顺铂只有小部分可以与染色体ＤＮＡ结合，发挥细胞毒性作用，而大部分与还原型谷胱甘肽结合，形成还原型谷胱甘肽／铂离子轭合物，容易被ＧＳＸ泵（ＡＴＰ依赖性还原型谷胱甘肽轭合物输出泵）泵出细胞外［１０］。而ＭＲＰ１是重要的ＧＳＸ泵［１１］。因此，大黄素与顺铂联合应用进一步下调ＭＲＰ１ｍＲＮＡ的表达水平，增加了癌细胞内化疗药物的浓度，是其提高胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞对顺铂敏感性的重要原因。 总之，大黄素可以提高胰腺癌细胞的化疗敏感性，并且在药物种类方面具有一定的普遍性，对非肿瘤细胞具有较低的毒副作用，为胰腺癌的治疗提供了一个安全有效的新方法。 参考文献 ［１］ ＺａｌａｔｎａｉＡ，ＭｏｌｎｒＪ．Ｒｅｖｉｅｗ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｃｋｇｒｏｕｎｄｏｆｃｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒ．ＩｎＶｉｖｏ，２００７，２１（２）：３３９－３４７． ［２］ ＳｔａｖｒｏｖｓｋａｙａＡＡ，ＳｔｒｏｍｓｋａｙａＴＰ．ＴｒａｎｓｐｏｒｔｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｔｈｅＡＢＣｆａｍｉｌｙａｎｄｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃ），２００８，７３（５）：５９２－６０４． ［３］ ＳｚａｋｃｓＧ，ＰａｔｅｒｓｏｎＪＫ，ＬｕｄｗｉｇＪＡ，ｅｔａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｃａｎｃｅｒ．ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ，２００６，５（３）：２１９－２３４． ［４］ ＤｅｅｌｅｙＲＧ，ＷｅｓｔｌａｋｅＣ，ＣｏｌｅＳＰ．ＴｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｏｆｅｎｄｏａｎｄｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃｓｂｙｍａｍｍａｌｉａｎＡＴＰｂｉｎｄｉｎｇｃａｓｓｅｔｔｅｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＰｈｙｓｉｏｌＲｅｖ，２００６，８６（３）：８４９－８９９． ［５］ ＨｕａｎｇＸＺ，ＷａｎｇＪ，ＨｕａｎｇＣ，ｅｔａｌ．Ｅｍｏｄｉｎｅｎｈａｎｃｅｓｃｙｔｏｔｏｘｃｉｔｙｏｆｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｄｒｕｇｓｉｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ：ｔｈｅｍｅｃｈａ 更多大黄素等植物提取物信息 www.staherb.com
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