牛黄解毒片中黄芩苷和大黄素的含量测定

摘要: 目的  研究测定牛黄解毒片中黄芩苷和大黄素的含量。方法  采用高效液相色谱法 色谱柱: SB -C18柱( 41 6mm @ 150mm, 5Lm) ; 流动相: 甲醇-01 2%磷酸; 检测波长 280nm; 柱温: 25 e ; 流速: 11 0mL#min- 1; 结果  黄芩苷在 51952 ~ 14818Lg#mL - 1

范围内线性关系良好( r =019994) , 平均回收率 971 5%, RSD 为 11 93%; 大黄素在 61 048~ 1511 2Lg#mL- 1范围内线性关系良好( r= 01 9970) , 平均回收率 961 6%, RSD 为1172%。结论  该方法灵敏度高, 重现性好, 可作为该制剂的质量控制方法。

关键词: HPLC; 大黄素; 黄芩苷; 牛黄解毒片

    牛黄解毒片,是清热解毒中成药的代表。由牛黄、雄黄、石膏、 大黄、 黄芩、 桔梗、 冰片和甘草组成,有清热解毒的作用,用于火热内盛、 咽喉和牙龈肿痛、 口舌生疮等症112。生产厂家较多,用药量较大。制剂中黄芩苷122和大黄素为其主要有效成分。因此为全面了解牛黄解毒片的质量, 对牛黄解毒片中有效成分黄芩苷和大黄素的含量进行了测定。

1   仪器、 药品与试剂

111  仪器  电子天平, 恒温水浴锅, 抽滤器, Agilent 1100 高效液相色谱仪, DAD 检测器。

112  药品与试剂   牛黄解毒片 ( 批号 8121775、 8121776、8121777) ,标准品: 黄芩苷( 中国药品生物制品检定所 批号110715 - 200212) , 大黄素( 中国药品生物 制品检定所 批号110756 - 200110) 。甲醇( HPLC) , 水为超纯水, 化学试剂均为分析纯。

2   黄芩苷与大黄素的含量测定

211   色谱条件与系统适用性研究  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂, 甲醇 -012% 磷酸溶液为流动相, 梯度洗脱程序( 见表 1) , 检测波长 280nm,流速 1 10mL#min- 1。

212   溶液的配制

21211   对照品溶液的配制:分别精密称取黄芩苷与大黄素对照品适量, 加甲醇制成每毫升含黄芩苷 0 1 1488mg, 大黄素011512mg 的混合贮备液。

表 1   洗脱程序

时间( min) 流速( mL#min- 1) 甲醇( %) 01 2%磷酸( %)

21212   供试品溶液的配制:取本品 10 片, 除去包衣,精密称定,研细,精密称取 1 1 0g, 加乙醇 30mL, 称定重量, 水浴回流1h,放冷,补足损失, 滤过, 取续滤液 25 1 00mL, 置烧瓶中, 水浴蒸干, 加 30%乙醇 -盐酸( 10B1) 30mL, 水浴回流 1h, 氯仿振摇提取 3 次, 每次 10mL, 蒸干, 残渣用甲醇溶解并定容于10mL 容量瓶中, 即得。

图1   HPLC 色谱图

A: 对照品色谱图  B: 样品色谱图  ( 1: 黄芩苷; 2: 大黄素)

213           线性关系考察  分别精密吸取对照品贮备液0 1 20m1100mL、 2 1 00mL、 3 100mL、4100、 5 1 00mL, 置 5mL 容量瓶中,甲醇定容到刻度。按色谱条件测定峰面积。以峰面积( A) 为纵坐标, 浓度(Lg#mL- 1) 为横坐标绘制标准曲线, 黄芩苷回归方程 y= 141978x- 331234, R= 0 1 9994, 结果表明黄芩苷在51952~ 14818Lg#mL- 1范围内线性关系良好。大黄素回归方程 y = 191571x - 42 1 427, r = 0 1 9970。结果表明大黄素在61048~ 15112Lg#mL- 1范围内线性关系良好。

214   精密度试验  取对照品溶液在上述色谱条件下连续测定 5 次, 黄芩苷的 RSD 为 0 1 95%,大黄素的 RSD 为 1148%,表明仪器精密度良好。

215  稳定性试验  取供试品溶液,在上述色谱条件下,分别于 1、 2、 3、 4、 5h考察供试品溶液的稳定性, 连续测定 5 次, 结果黄芩苷的RSD 为 2102%, 大黄素的 RSD 为1103%, 表明样品在 5h 内稳定。

216   重复性试验  取同一批样品,按供试品制备方法进行处理, 按色谱条件进行测定,黄芩苷平均含量为 0 1 8644mg#g- 1,RSD 为 1 1 54%, 大黄素平均含量为 1 1 0665mg# g- 1, RSD 为115%。

217   加样回收率测定   精密称取已知含量的牛黄解毒片样品015g, 精密加入对照品贮备液 5mL, 按供试品制备方法制备测定, 黄芩苷平均回收率 9715%, RSD 为 1193%, 大黄素平均回收率 96 1 6%, RSD 为 1 1 72%。

218  样品测定  按供试品制备方法, 按色谱条件进样,分别精密吸取对照品三依中文溶液与供试品溶液各 5ul, 注入液相色谱仪,色谱图( 见图 1) ,测定牛黄解毒片中黄芩苷含量为 0 1 8652mg#g- 1、 大黄素的含量为 110749mg#g- 1。

3   讨论

311   2010版药典中只对其有效成分黄芩苷做了规定,而另一有效成分大黄素则未有规定122,本文同时测定牛黄解毒片中黄芩苷和大黄素的含量,具有操作简单, 稳定,精密度高, 重现性好等优点, 可以作为该制剂的质量控制方法。

312   本试验最终确定了以甲醇 - 0 1 2% 磷酸梯度洗脱系统, 样品中的黄芩苷和大黄素能得到良好的分离, 使本来需要多次的分析方法一次完成; 通过参考文献对比提取方法13~ 52,最终确定醇回流提取 1h 后酸化提取, 再用氯仿萃取的方法, 得到的样品含量较高。

参考文献

112李静瑜1HPLC 法测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量1J21 中国药师, 2001, 4( 5) : 356 -3571

122中华人民共和国药典委员会1 中国药典, 2010, Ñ 部1S21 北京: 化学工业出版社, 5661

132张科伟, 李伟, 蔡皓, 等1HPLC 双波长法测定一清胶囊中黄芩苷、大黄素的含量1J2 1 中成药, 2005, 27( 6) : 653 - 6551

142吴丽群1HPLC 法测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量1J21