牟书才 安柏晶

(黑龙江仁合堂药业有限责任公司， 黑龙江 牡丹江， 157011)

【摘要】 目的： 建立反相高效液相色谱法测定排毒清脂片中大黄酸和大黄酚总量的测定。方法： 采用回流提方法制备供试品溶液， 以 C18 柱作为色谱柱， 甲醇 -0.1%磷酸 (85:15) 为流动相; 流速： 检测波长： 254nm。样品平均加样回收率为 99.16%(n=6) ,RSD值为 1.07%,重复性试验RSD值大黄素为 1.99%(n=6),大黄酚为1.13% (n=6)。 结论： 方法简便， 准确， 重复性好， 可作排毒清脂片的含量测定方法。

【关键词】 排毒清脂片; 高效液相色谱法; 含量测定 大黄提取物大黄素 上禾生物大黄素

大黄为方中君药， 具有较强的泻下、 抗菌、 抗炎作用， 主要活性成分大黄素和大黄酚等，故测定大黄素和大黄酚的含量对控制本品质量具有较大意义。对本品中的大黄素和大黄酚进行了含量测定研究。试验结果表明，在选定条件下， 分离效果良好， 方法线性、 稳定性、 重现性、 回收率等方法学考察均符合定量测定的要求， 因此采用此方法， 作为控制本品质量的指标。

1 仪器、 试药与样品

1.1 仪器： 日本岛津 LC-2010A 高效液相色谱仪、 二极管阵列检测器。

1.2 试药： 大黄素 (批号： 110756-200110)、 大黄酚 (批号：110796-200310) 由中国药品生物制品检定所提供; 甲醇 (色谱纯)， 磷酸 (分析纯)， 水 (纯净水)。

1.3 样品：自制三批。(规格：本品为薄膜衣片，每片重0.37g)

2 方法与结果

2.1 样品的制备 取重量差异项下的本品， 除去薄膜衣， 精密称定， 研细， 取 0.15g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入甲醇 50ml， 称定重量， 加热回流 60 分钟， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得。

2.2 阴性样品溶液的制备 按质量标准处方比例同法制备不含大黄的阴性样品溶液。

2.3 对照品溶液的制备 分别精密称取大黄素对照品与大黄酚对照品适量，加甲醇溶解制成每 1ml 含大黄素4.024ug、 大黄酚7.928ug的混合溶液。

2.4 检测波长的选择 取上述对照溶液， 用紫外可见分光光度计在波长 190-500nm 处扫描， 结果， 大黄素在 252nm处有吸收峰， 大黄酚在 256nm 处有吸收峰， 故检测波长为254nm。

2.5 色谱条件 色谱柱： C18 柱(岛津 VP-ODS C18 150×4.6mm)， 流动相： 甲醇 -0.1%磷酸 (85:15); 流速： 1.0ml/min，柱温： 25℃; 检测波长： 254nm。

2.6 线性关系考察 精密称取大黄素对照品 10.06mg， 置100ml 量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀， 分别精密吸取 0.5ml、 1ml、 2ml、 4ml、 8ml， 分别置 50ml 量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀， 即得， 分别进样10μl， 测定， 以峰面积积分 A 对大黄素进样量 C(μg)进行回归分析， 得回归方程： A=3696277C-2944,r=0.9999。 表 明 大 黄 素 进 样 量 在0.01006～0.16096μg范围内线性关系良好。精密称取大黄酚对照品 9.91mg，置 100ml 量瓶中， 按照大黄素的方法测定， 得回归方程： A =4867681C-5658,r=0.9999。 表明大黄酚进样量在0.01982～0.15856μg范围内线性关系良好。

2.7 精 密 度 试 验 分 别 取 大 黄 素 对 照 品 溶 液(4.024μg/ml)、 大黄酚对照品溶液 (7.928μg/ml)， 重复进样5 次， 记录峰面积， RSD 分别为： 0.17%， 0.13%， 表明精密度较好。

2.8 重复性试验 按供试品溶液的制备方法，对同一批样品分别制备 6 份供试品溶液， 依法测定， 计算大黄素、 大黄酚的含量及相对标准偏差， RSD分别为： 1.99%、 1.13%2.9 稳定性实验 取同一批号样品溶液，分别在放置 0、 2、4、 6、 8h 后， 依法操作， 测定峰面积 A， RSD 分别为 0.27%、0.34%， 表明稳定性较好。

2.10 加样回收率实验 精密称取已测知含量的样品 (大黄素含量 1.431mg/g、 大黄酚含量 3.048mg/g) 0.075g， 分别精密加入 0.1006mg/ml 大黄素对照品溶液(精密称取大黄素对照品 10.06mg，置 100ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀， 即得) 1ml、 0.1027mg/ml 大黄酚对照品溶液 (精密称取大黄酚对照品 10.27mg， 置 100ml 量瓶中， 加甲醇溶解并定容至刻度， 摇匀， 即得) 2ml， 挥去溶剂， 按样品测定项下操作，依法测定， 6 次平均回收率为 101.79%， RSD 为1.46%， 表明方法回收率较好。

2.11 样品测定 按正文含量测定方法依法测定本品， 以峰面积按外标一点法计算样品中大黄素、 大黄酚的含量， 结果每片大黄以大黄素和大黄酚的总量平均 1.571%， RSD 为1.56%， 含量较可靠稳定。

3 讨论与小结

样品溶液的制备比较了甲醇加热回流法;甲醇加热回流、 氯仿萃取法; 甲醇加热回流提取、 酸水解、 氯仿萃取法(原剂型含测方法)。结果显示水解与不水解测得的大黄素和大黄酚的含量差别不大，说明本品主要为游离蒽醌类成分， 故直接测定。 结果还表明用甲醇直接加热提取即可达到较好的分离效果， 不必进行纯化处理， 考察了加热回流时间(0.5h、 1h、 1.5h、 2h)， 结果加热回流1h 即可提取完全。含量限度的确定 根据所测本品十批样品， 含量最高为 1.561mg/片， 最低为 1.267mg/ 片， 排毒清脂胶囊规定每粒含大黄素、大黄酚计， 不得少于 0.8mg/ 粒。本品 1 片所含药材量与原剂型 1 粒所含药材量相同。故暂定本品含量限度为每片含大黄以大黄素 (C15H10O5) 和大黄酚(C15H10O4)的总量计，不得少于 0.8mg。

参考文献

[1] 韩刚，等. 通脉降脂胶囊质量标准研究. 中成药.2005， 27 (7) :778-780

[2]王英俊， 等.六味安消散质量标准的研究.中国民族医药杂志.2005 (4)： 36-37

[3] 李武营，等. 汝安膜质量标准研究. 河南大学学报(医学版) .2005， 24 (2)： 5-7

[4] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典 2005 年版一部.大黄项下P17.

高效液相色谱法测定排毒清脂片中大黄素和大黄酚的总量

绿原酸Chlorogenic acid327-97-9

绿原酸（氯原酸,咖啡鞣酸）对照品 绿原酸98%,30%,25% 杜仲提取物Eucommia Ulmoides  P.E.

熊果酸Ursolic acid  77-52-1 熊果酸对照品

熊果酸（乌索酸 乌苏酸）98%,95%,90%,25%,10%  枇杷叶提取物Loquat Leaf P.E

金银花提取物HoneySuchle Flowers Extract

绿原酸（氯原酸,咖啡鞣酸）Chlorogenic acid 327-97-9绿原酸98%,6%,5%

淫羊藿提取物  Epemidium Extract

淫羊藿甙、淫羊藿甙Icariin  489-32-7  淫羊藿甙60-98% 淫羊藿甙对照品

大花紫薇提取物Banaba P.E

科罗索酸corosolic acid4547-24-4   科罗索酸对照品 科罗索酸1-98%

苦杏仁提取物Bitter Apricot Seed P.E

苦杏仁苷 苦杏仁甙 Amygdalin29883-15-6  苦杏仁甙98%HPLC

大黄素（朱砂莲甲素）Emodin  大黄提取物 大黄素5-98%

藤茶提取物Ampelopsis grossedentataP.E

二氢杨梅素（双氢杨梅素 二氢杨梅树皮素）Dihydromyricetin 27200-12-0

杨梅素 杨梅树皮素Myricetin  杨梅树皮提取物529-44-2

丹参提取物Salvia root P.E

丹参酮IIA   Tanshinone ⅡA568-72- 9 98%   HPLC

隐丹参酮