【关键词】超声波 热回流 枇杷叶 熊果酸 提取效果

【文　摘】熊果酸在植物体内以游离或结合形式存在，其提取方法多以乙醇为溶剂加热回流提取。为了考察该法的提取效果，用超声波对枇杷叶及其药渣中的熊果酸进行研究：取枇杷叶及其药渣，以乙醇为介质，超声波辅助提取；用HPLC法测定提取液中熊果酸的含量。结果显示：枇杷叶中熊果酸的含量为0．9％以上；乙醇回流法提取后的药渣中，熊果酸的含量为0．3％以上，其提取率仅为2／3。结论：乙醇回流法的提取效果较差；提取次数增加，其效率无明显改善；加酸水解不能提高其得率。表明枇杷叶中的熊果酸主要以游离形式存在。

    蔷薇科枇杷属植物枇杷[Eriobotrya japonica(Thunb．) Lind1．]的干燥叶具有清肺止咳、降逆止呕功能，主治肺热咳嗽、气逆喘急、胃热呕逆、烦热口渴 。现代研究表明，枇杷叶中主要药用成分为熊果酸 。目前，我国医药工业中，枇杷叶主要用于水煎法生产抗炎止咳药枇杷糖浆等中成药制 剂，药渣未被利用。本试验对枇杷叶醇提后的药渣中熊果酸进行了提取分离研究，现报告其结果。

 1 供试原料、试剂与仪器

 1．1 原料与试剂

 枇杷叶购于江西省宜春市万载县；95％ 乙醇，食用级(广 西糖厂)；“YCXY一1号”除杂剂(自制)；活性炭，分析纯(上 海豪申化学试剂有限公司)；甲醇，色谱纯(上海陆忠试剂 厂)。熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110742 — 200314，供含量测定用)。

 1．2 仪器

 Waters一515型双泵高效液相色谱仪，2996光电二极管 矩阵检测器(美国)；Perkin—Elmer傅立叶变换红外光谱仪 (美国)；FC一204分析天平(上海天平分析仪器厂)；KS一 1500超声清洗器(宁波科声仪器厂)。

 2 检测方法

 2．1 色谱条件

 色谱柱为Nova PakC。 色谱柱(3．9 mm×300 him，5 m，美国Waters公司)，柱温25 ，流动相为甲醇一水(V／V=88 ：12)，流速0．8 ml／min，检测波长为210 nm。

 2．2 线性关系考察

 精确称取熊果酸对照品11．4 mg，置于l0 mI容量瓶中， 用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含熊果酸1．14 mg／ml 的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2、5、8、11、14 l进样平行3次，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y=5．99×10 一1．09×10 (r= 0．999 99)。结果表明，当熊果酸进样量为2．28～l5．96 g 时，线性关系良好。

 2．3 精密度试验

 以同一对照品溶液重复进样5次，每次10 l，分别测定 峰面积。结果熊果酸峰面积RSD为0．3％。

 2．4 重复性试验

 精确称取干燥至恒重的同一批枇杷叶样品5份(每份 2．0 g)，用乙醇回流提取，提取液经处理后进样。进样量15 l，测定峰面积。结果熊果酸峰面积RSD为1．8％ 。

 2．5 加样回收率试验

 精密称取已知熊果酸含量的枇杷叶5份，每份2．0 g，加 入熊果酸对照品适量。样品经超声提取1 h ，提取液经处 理后进样，用外标法计算熊果酸的含量，结果熊果酸的平均回收率为99．6％ ，RSD为1．3％。

 3 样品制备及测定结果

 3．1 提取时间的选择

 精密称取烘干后的枇杷叶原粉(2O目)各3 g，置具塞三 角烧瓶中，加入40 ml 95％ 乙醇，分别经超声波提取0．5、1．0、 1．5、2．0 h。在各时间点取样2 ml(原液中补充2 ml 95％ 乙 醇)，过滤，于离心机(3 000 r／min)中离心5 min，取上清液用 0．45 Ixm微孔滤膜滤过，进样检测，测得熊果酸含量在1．0 h 后基本不变，故提取时间确定为1．0 h。

 3．2 样品溶液的制备

 将醇提、酸性乙醇提取过的药渣挥干溶剂。取枇杷叶原 粉及挥于溶剂后的各药渣分别于60 烘干24 h。精密称取 样品各3 g，按前文3．1的方法提取、过滤，分别定量转移至 50 ml容量瓶中，以乙醇定容，摇匀后取滤液各2 ml，离心5 min，上清液用0．45 m微孔滤膜滤过，得样品溶液。

 3．3 样品的测定

 吸取样品溶液各15 l进样，测定熊果酸的峰面积，用外 标法计算含量。结果见表1。

 4 讨论

 利用超声波辅助技术提取各样品中的熊果酸，结果表明 原料药中熊果酸的含量在0．9％ 以上，而传统的乙醇回流法 提取后的药渣中，熊果酸的含量仍在0．3％以上，其提取效率 仅为2／3，提示乙醇回流法的提取效果较差。熊果酸在植物体 内可以游离或结合形式存在。本试验研究结果显示，加酸并未提高其得率，表明枇杷叶中的熊果酸主要以游离形式存在。 用乙醇回流提取时，提取次数增加，效率并无明显提高，从节约角度考虑，提取2次即可视为提取完全。乙醇回流提取法 被认为是有效成分提取的适宜方法，随着科学技术的不断进 步，现代高新提取技术有了快速发展。超声波辅助技术 具有省时、节能、对有效成分的活性影响小、提取效率高等优点，在现代药物制剂生产中的应用备受关注。