关键词：熊果酸、镇静催眠

     熊果酸又名乌苏酸、乌索酸，属非极性五环三萜类化合物，其植物资源分布广泛。据报道，熊果酸具有中枢镇静作用，可拮抗谷氨酸的神经毒性。给小鼠灌胃熊果酸50 mg／kg，可明显减少其自发活动，并延长阈上剂量苯巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间 。另有试验证明熊果酸可通过激活转录因子NF．KB促进小鼠静息巨噬细胞TNF-a、iNOS基因表达，从而促进巨噬细胞释放TNF—Or．和NO ，而TNF-0、NO 为重要的睡眠调节因子。笔者通过研究熊果酸对睡眠剥夺大鼠脑内IL．113、TNF．和NO含量的影响，探讨了熊果酸的镇静催眠作用机理。

l 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 试验动物。Wister大鼠，雄性，体重(230±20)g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供，许可证号：黑动字第 POOl01006。

1．1．2 药品与试剂。熊果酸(纯度>98％ ，批号：RS—uA2006o810)；一氧化氮试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20070601，20071001)；碘[1251]肿瘤坏死因子一d放射免疫分析药盒(北京普尔伟业生物科技有限公司，批号：07l101)；碘[1251]白细胞介素一1B放射免疫分析药盒(北京普尔伟业生物科技有限公司，批号：071101)；戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司生产，批号：Lot． No．WS20060401)。

1．1．3 仪器。GC．1500型 放射免疫计数器(北京顺杰欣隆科技有限公司)；日立KY2000半自动生化仪(天津开元医疗设备有限公司)；大鼠失眠刺激器(哈尔滨电工仪表研究所)；KDC-40低速离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)。

1．2 方法 将动物饲养在通风、避光、电磁屏蔽环境内，采用自动定时光控系统对其生活环境实行每天12 h的明暗光照周期处理，环境温度(22±2)℃ ，相对湿度45％ ～50％。取 20只试验动物随机分成空白对照组、模型组和模型+给药组，每组10只。试验当日，足底电刺激法剥夺模型组和“模型+给药”组大鼠睡眠，睡眠剥夺时间为8：00～l6：00，空白对照组仍饲养在正常明暗交替环境中。大鼠采用腹腔注给药方式，于下午16：00开始给药，熊果酸给药剂量44．8 mg／kg，3组大鼠给药体积均为10 ml／kg，给药4 h后将大鼠断头处死，立即剥离脑组织，取大脑前额叶皮质、海马、下丘脑，分离的脑组织用分析天平精确称量，按质量比1：9加冰的生理盐水，用玻璃匀浆器手工匀浆后3 000 r／min离心l5 min，取上清，用Griess法测定NO的的含量，放免法测定大鼠脑组织匀浆中IL_1 B和TNF．0l含量。

1．3 数据处理 试验数据采用SPSS 13．0 FOR WIND0WS 软件进行处理，分别进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，并用LSD或Dunnett T3法进行两两比较。

2 结果与分析

试验结果表明，模型组与空白组相比，大鼠大脑皮质、海马和下丘脑NO水平均有升高趋势，但变化不明显。熊果酸 组与空白组和模型组相比，大鼠各脑区内NO含量明显增加 (P<0．05)。模型组与空白组相比，大鼠各脑区IL．1B和 TNF．的含量变化不明显。熊果酸组与空白组和模型组相比大鼠各脑区中IL．1 B和TNF— 的含量变化不明显(表1)。

3 讨论

IL一1B和TNF-仪是研究较为透彻的睡眠调节因子，向脑室内注入IL-IB或TNF-a可增加NREM睡眠，抑制其中之一可抑制自发睡眠和睡眠剥夺后的睡眠反弹。睡眠剥夺后脑内IL-18和TNF-OL水平升高可诱导下游事件如NO，GHRH， NGF和NF-KB等水平的变化 。据报道，NO在细胞因子调节生理性睡眠过程中起到桥梁作用，NO至少部分介导了 TNF-0【对NREM的正调节作用， 睡眠剥夺可引起机体对 NO需要的增加，而增加的NO作为信使分子，可引起一系列的连锁反应，导致促进睡眠因子的产生和积累，这些因子积 累到一定程度后可引起睡眠.

该试验结果显示，足底电刺激法剥夺大鼠睡眠后，大鼠各脑区的NO、IL-113和TNF-Ot水平并无显著变化，因为此方法只剥夺了大鼠的快动眼睡眠时相，而短暂的小睡可部分抵抗这种刺激对大鼠机体的影响。给予熊果酸后，大鼠脑内的 NO含量明显增加，而IL一1B和TNF-0【水平略有升高的趋势但变化并不明显，推测熊果酸镇静催眠的作用可能与NO调节睡眠的作用直接相关。NO水平的上升可能与睡眠调节因子IL一1B和TNF- 有关，但三者水平的变化并不同步，试验证明TNF一0【可促使nNOS磷酸化，从而抑制nNOS的活性 ，而这种抑制又可通过负反馈作用促进nNOS基因的表达，使NO 含量增加。正因为存在这种负反馈调节机制，IL一1 B和TNF．作为NO的上游事件，两者水平升高可能出现在NO之前，有关IL一1 B和TNF．仅与熊果酸镇静催眠作用的相关性有待进。 

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