作者：陈求芳,李华,周毅生

【摘要】  目的建立测定平喘贴中苦杏仁苷含量的 方法。方法 采用高效液相色谱法，用Inertsil ODS-3 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇-1‰磷酸(体积比21∶79)为流动相；流速为1.0 mL·min-1，检测波长为210 nm。结果 在0.12～1.2 μg范围内，峰面积与进样量的线性关系良好（r=0.9998），加样回收率为97.32％，RSD为1.07％。结论该法简便、可靠、准确，结果满意。

【关键词】  HPLC；平喘贴；苦杏仁苷；含量测定

　　平喘贴是以麻黄、杏仁等中药制成的外用制剂，具有宣肺散寒平喘、清热化痰止咳之功效，用于治疗 止咳平喘等症。苦杏仁苷是苦杏仁中的主要有效成分［1，2］。本文采用反相高效液相色谱法测定平喘贴中苦杏仁苷的含量，结果表明该法简便、准确、灵敏，可作为苦杏仁药材及其制剂的质量监控方法。

　　1 仪器与试药

　　Agilent-1100高效液相色谱仪，VWD检测器及其配套色谱工作站；苦杏仁苷对照品由 中国药品生物制品检定所提供，批号：820-200201；平喘贴由湖北中医学院 分析 测试中心提供，所用蒸馏水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

　 　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：Inertsil ODS-3 C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-1‰磷酸(体积比21∶79)，流速：1.0 mL·min-1，柱温：30 ℃，检测波长：210 nm。

　　2.2 对照品溶液的制备

　　精密称取在105 ℃干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.12 mg的对照品溶液。

　　2.3 供试品溶液的制备

　　刮取贴膏1.0 g，精密称定，置烧瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，回流提取1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液2 mL，置中性氧化铝柱（100～200目，2 g，内径1 cm）上，用体积分数为50%的甲醇洗脱，收集洗脱液约9 mL，置10 mL容量瓶中，加磷酸1滴，用体积分数为50%的甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

　　2.4 系统适应性试验

　　分别精密吸取对照品溶液6 μL，供试品溶液5 μL，注入液相色谱仪中测定。结果苦杏仁苷在20 min内出峰，而且与前后的峰均有较好的分离， 理论 板数在3 000以上。见图1。

　　按照本品制剂中的工艺制得除去苦杏仁的空白制剂，与供试品溶液色谱和苦杏仁对照品色谱比较，结果表明阴性样品无干扰。

　　1.苦杏仁苷 A.对照品 B.样品 C.空白阴性对照

　　图1 苦杏仁苷对照品（A）、供试品（B）和空白阴性对照（C）的色谱图（略）

　　Fig.1 Chromatograms of amygdaloside (A)，sample and negative control without amygdaloside (C)

　　2.5 线性关系考察

　　分别精密吸取“2.2”项下制备的对照品溶液1，4，6，8，10 μL，进样测定，以峰面积（A）为纵坐标，对苦杏仁苷含量（m）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=1323.276 m-9.71，r=0.9998，结果表明苦杏仁苷在0.12～1.2 μg的范围内线性关系良好。

　　2.6 精密度试验

　　精密吸取“2.2”项下制备对照品溶液6 μL，进样测定5次，测定峰面积，结果RSD=0.71%（n=5），表明精密度较好。

　　2.7 稳定性试验

　　分别精密吸取同一份供试品溶液5 μL，于0、3、6、9、24 h进样，测定其苦杏仁苷峰面积积分值，RSD=1.16 %(ｎ＝5)，表明样品在24 h内稳定。

　　2.8 重复性试验

　　取同一批样品，精密称定5份，按“2.3”项 方法 制备，进样测定。结果平均含量为9.488 mg·g-1，RSD=1.15%(n=5)，表明方法重现性较好。

　　2.9 加样回收试验

　　取已知含量的样品约0.3 g，精密称定，分别精密加入苦杏仁苷对照品溶液（1.0 mg·mL-1）3 mL，依法制备，测定并计算 回收率，平均回收率为97.32％，RSD=1.07％，结果见表1。

　　表1 苦杏仁苷加样回收率试验结果（略）

　　Tab.1 Recovery of assay(n=5)

　　2.10 样品测定

　　精密称取5批样品，分别按“2.3”项方法制备，测定，结果见表2。

　　5批样品平均含量为13.293 mg/张。考虑到实验室样品的制备与工厂大规模生产的差异、药材产地、采收季节的差异，故把平均含量下浮20%，则含量限度可暂定为：本品含苦杏仁苷应不得低于10.6 mg/张。

　　表2 样品测定结果（略）

　　Tab.2 Determination of the sample

　　 3 讨论

　　3.1 供试品制备方法的考察

　　分别精密吸取2 mL甲醇溶液置1.5、2、2.5、3 g中性氧化铝柱上，用体积分数为50%的甲醇洗脱，收集10 mL洗脱液，加磷酸1滴，测定，结果显示2 g的氧化铝效果最佳。分别精密吸取2 mL甲醇溶液置2 g中性氧化铝柱，用体积分数为50%的甲醇洗脱，分别收集5、10、15、20、25 mL洗脱液，加磷酸1滴，测定，结果表明洗脱液10 mL基本洗脱完全。并且考察不同提取时间，提取方法对苦杏仁苷含量的 影响 。结果采用回流提取1 h效果较好。

　　3.2 流动相选择

　　曾以不同比例的甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙腈-水作为流动相，结果发现流动相中加入乙腈峰形变差，而苦杏仁苷的龙胆双糖部分有较多的醇羟基，可加入H3PO4起离子抑制作用，甲醇-1‰磷酸溶液体系中苦杏仁苷与相邻峰达到基线分离，保留时间适宜，故选择其作为流动相。

　　3.3 柱温选择

　　曾考察柱温为25 ℃、30 ℃，结果发现柱温30 ℃时，苦杏仁苷和干扰成分可达到基线分离。复方中其他成分对苦杏仁苷测定无干扰。

【 参考  文献 】

　　［1］ 杨书斌，刘青，孙立立，等.HPLC测定苦杏仁饮片中苦杏仁苷的含量［J］.中成药，2006，28（10）：1452-1454.

　　［2］ 钟文，唐新，谢培德，等.HPLC测定止带消糜栓中苦杏仁苷的含量［J］.中成药，2006，28（5）：766-767.

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