付志玲,房敏峰,王启林,王世祥,于　洁,肖超妮,郑晓晖

(西北大学生命科学学院,陕西西安710069)

摘要: 采用正交试验法,以苦杏仁苷为指标,优选烘法炮制苦杏仁的最佳工艺;同时考察温度、时间、物料厚度对苦杏仁苷的影响. 结果表明最佳炮制工艺为:将净苦杏仁置电热干燥箱中, 150 ℃烘烤30min. 优选出的炮制工艺稳定可行,重现性好,为烘法炮制苦杏仁提供了量化工艺参数和质量控制指标.

关键词: 苦杏仁;烘法;炮制工艺;正交试验

　苦杏仁具有降气止咳平喘,润肠通便的功效,微温,有小毒,主要成分为苦杏仁苷[ 1 ] . 临床常炮制后用药,以杀酶保苷,减毒增效[ 2 ] . 目前主要的炮制工艺有燀制和炒制,但具体的量化参数不甚明确,多以成品的外观性状作为参考指标,标准难以统一. 有研究表明炒法保留的苦杏仁苷含量最高,止咳平喘作用最强[ 3 - 5 ] . 烘和炒都是干加热,炮制原理相近,且烘法利用现代设备,各项指标更易于控制[ 6 - 7 ] . 因此,本文以苦杏仁苷为指标,参考炒法主要影响因素,考察电热干燥箱烘烤炮制苦杏仁的最佳工艺,为实现苦杏仁炮制的自动化,规范化提供适应性设备和技术参数.

1　仪器与试药

1. 1　仪器

岛津LC - 10AT vp高效液相色谱仪; SPD - 10Avp紫外检测器; SH IMADZU CBM - 102色谱工作站(日本Shimadzu Corp ration ) ; FA2004 型电子天平(中国上海良平仪器仪表有限公司) ; GZX -9070MBE型数显电热鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂) ; KQ2200DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司).

1. 2　试药

苦杏仁苷对照品,购自中国药品生物制品检定所(批号: 110820 - 200403,供含量测定用). 苦杏仁药材购于陕西省药材公司,经西北大学王玛丽副教授鉴定为蔷薇科植物杏Prunus arm eniaca L. 的干燥成熟种子. 乙腈为色谱纯(美国Fisher公司) ,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯.

2　方法与结果

2. 1　苦杏仁苷的含量测定

2. 1. 1　色谱条件

Diamonsil C18色谱柱(250mm ×4. 6mm, 5μm) ,流动相:乙腈- 水(10∶90) ;流速: 1. 0 mL·min- 1 ;检测波长: 215 nm;柱温: 25 ℃;进样量: 10μL[ 8 ] . 在此条件下,苦杏仁苷对照品及样品色谱图见图1.

2. 1. 2　对照品溶液的制备

精密称取苦杏仁苷对照品5. 0 mg置5 mL容量瓶中,加甲醇溶解稀释至刻度,摇匀,制备得对照品储备液.

2. 1. 3　供试品溶液的制备

取苦杏仁研碎,过筛. 精密称取粉末1. 0 g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,超声振荡30min,静置过滤,将滤液置25 mL容量瓶中,补足甲醇至刻度即得供试品溶液[ 9 ] .

2. 1. 4　线性关系考察

精密量取苦杏仁苷对照品储备液适量,制成系列对照品溶液,按2. 1. 1项下色谱条件下进样测定,将峰面积Y 与质量浓度X 进行回归,得线性回归方程:

苦杏仁苷在0. 03～1. 00 mg·mL - 1范围内呈现良好的线性关系.

2. 1. 5　精密度试验

以质量浓度为0. 5 mg·mL - 1的对照品溶液为考察对象,在上述色谱条件下连续进样5次,测得苦杏仁苷峰面积的RSD为2. 08% ,表明本法精密度良好.

2. 1. 6　重复性试验

取苦杏仁样品按供试品溶液制备方法平行制备5份, 进样分析. 测得苦杏仁苷峰面积的RSD 为2. 80% ,表明方法重复性良好.

2. 1. 7　稳定性试验

取苦杏仁供试品溶液,室温放置,在拟定色谱条件下于0, 2, 4, 6, 8 h分别进样,测得峰面积的RSD为2. 96% ,表明供试品溶液中苦杏仁苷在8 h内稳定性良好.

2. 1. 8　加样回收率试验

取已知苦杏仁苷含量的苦杏仁粉末5 份,各0. 25 g精密称定,分别精密加入苦杏仁苷对照品适量,按供试品溶液制备方法制备,在拟定色谱条件下进行测定,计算,得苦杏仁苷的平均加样回收率为98. 5% , RSD为2. 50% ,表明该测定方法测定结果准确. 结果见表1.

2. 1. 9　样品测定

按2. 1. 3项下供试品溶液的制备方法,对各批苦杏仁中苦杏仁苷的含量进行测定.

2. 2　炮制方法

取净苦杏仁置于电热干燥箱中,在设定条件下烘制,取出,放凉.

2. 3　影响因素的优选

2. 3. 1　温度对苦杏仁中苦杏仁苷含量的影响取苦杏仁100 g,平行3份. 分别于80, 90, 100,

110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180 ℃烘制1 h,测定苦杏仁苷的含量,结果见表2.

由表2可见, 150～170 ℃时具有较好的烘制效果,低于130 ℃时苦杏仁苷被完全酶解.

2. 3. 2　时间对苦杏仁中苦杏仁苷含量的影响取苦杏仁100 g,平行3份. 在150 ℃分别烘制

15, 30, 45, 60, 75 min取样,测定苦杏仁苷的含量,结果见表3.

由表3可以看出30～60 min具有较好的烘制效果.

2. 4　正交试验及方差分析

以烘制时间、烘制温度和物料厚度为考察因素,每个因素拟定3个水平,设计正交试验(见表4).

2. 4. 1　正交试验设计及结果

利用L9 (34)正交表安排试验(见表5) ,以苦杏仁苷(C20H27NO11 )含量为指标,确定最佳炮制工艺.(试验结果见表5,方差分析结果见表6)

从正交表和方差分析表可以得出,影响苦杏仁苷含量因素的主次顺序为A > C > B,最佳工艺为A1B1 C3 ,即物料厚度为5 cm,在150 ℃下烘制30min,取出.

2. 4. 2　炮制工艺验证

取苦杏仁100 g,平行3份,物料厚度为5 cm,150 ℃烘制30 min,取出. 结果见表7.

由表7可以看出,恒温烘烤苦杏仁的炮制工艺稳定可行.

3　讨论

本试验选择了索氏提取法、回流提取法、超声提取法3种方法进行了对比考察,结果表明超

声提取法方便快捷易于控制,优于其它2种方法. 同时对提取溶剂甲醇、50%甲醇、水和超声时间30, 45, 60 min进行了考察,结果表明用甲醇提取30 min所得提取率最高,且无杂质干扰,故选择用甲醇超声30 min的提取方法.

由于时间和温度的范围较广,因此在进行正交试验之前,对烘制时间和温度两个因素进行了初步的优选,为正交试验设计提供可靠的依据.

随着中药现代化的深入,传统炮制工艺随着新技术和新设备的引入逐步向机械化、自动化和科学化方向发展[ 10 ] . 本文采用电热鼓风干燥箱炮制苦杏仁,所得苦杏仁苷含量高,达到了破坏酶的目的,且易于控制,制品质量均一,适宜工业化推广应用. 虽与炒法原理相近,但亦有不同之处,能否代替炒法还需进一步研究.

参考文献:

[ 1 ] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) [M ]. 北京:化学工业出版社, 2005: 140 - 141.

[ 2 ] 梁爱华,聂淑琴,薛宝云,等. 炮制对苦杏仁特殊毒性及药效的影响[ J ]. 中国中药杂志, 1993, 18 ( 8 ) : 474- 477.

[ 3 ] 侯嵘峤. 苦杏仁的炮制原理[ J ]. 沈阳药科大学学报,1997, 14 (2) : 130 - 132.

[ 4 ] 李贵海,刘青,孙付军. 不同炮制方法对苦杏仁主要药效作用的影响[ J ]. 中成药, 2007, 29 (7) : 1031 - 1034.

[ 5 ] 李贵海,董其宁,孙付军,等. 不同炮制对苦杏仁毒性及止咳平喘作用的影响[ J ]. 中国中药杂志, 2007, 32(12) : 1247 - 1250.

[ 6 ] 张宏安,朱素芳,东友. 中药苦杏仁的炮制研究[ J ]. 现代中医药, 2004 (2) : 68 - 69.

[ 7 ] 张学兰,徐维芬. 苦杏仁炮制研究[ J ]. 山东中医学院学报, 1994, 18 (1) : 56 - 58.

[ 8 ] 吕伟峰,丁明玉. 高效液相色谱法测定山楂中的苦杏仁甙[ J ]. 色谱, 2005, 23 (5) : 496 - 498.

[ 9 ] 邹节明,袁伟恩,蒋治良,等. HPLC法测定蛤蚧定喘胶囊中苦杏仁苷的含量[ J ]. 中草药, 2004, 35 ( 1 ) : 45- 46.

[ 10 ] 林银财. 中药传统炮制与现代化[ J ]. 海峡药学, 2004,16 (4) : 93 - 9

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