刘磊，何再安，余子川， 吴和珍，刘超英，刘焱文

(湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室，湖北 武汉430061)

[摘要]目的：考察不同型号的大孔吸附树脂对金银花中绿原酸的提取纯化效果，为在中药纯化研究中应用树脂吸附纯化法，进一步开发金银花的相关产品提供参考。方法：用HPLC法测定绿原酸含量；采用动态吸附法，考察大孔树脂的吸附、解吸附性能和纯化效果。结果：LS一303树脂综合性能最佳，提取液在酸性条件下吸附量佳。结论：LS-303大孔树脂对绿原酸的提取纯化效果果较好，可用于工业化生产。

[关键词]金银花；绿原酸；大孔树脂

金银花是忍冬科植物忍冬的干燥花蕾，是临床常用的中药材之一。绿原酸(chlorogenic acid，CHA)是金银花的主要药用成分，具有显著的清热解毒和抗菌消炎作用，对消化道癌症有明显的抑制作用，与人体血小板凝集和凝血因子的生成有关，还具有抗生育作用及对免疫系统的调节作用。绿原酸类化合物是含有羧基和邻二酚羟基的有机酸，易溶于水、醇、丙酮等溶剂。从金银花中提取绿原酸多采用煎煮法、浸渍法、回流法等。传统分离纯化绿原酸的方法有沉淀法、萃取法、层析法等，但沉淀法分离效果不好，萃取法溶剂用量大，层析法成本高、操作复杂。本文以金银花水提醇沉后的滤液为样品液，考察了不同大孔树脂吸附纯化绿原酸的效果，试图为吸附纯化法在中药制剂研究中的应用和进一步开发金银花的相关产品提供参考和依据。

1 仪器与试药

Agilent 1 100 series高效液相色谱仪(G1322A排气阀，G1311A泵，G1316A柱温箱，G1314A紫外检测器)；ehemistation色谱工作站；Kromasil Cls色谱柱。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110753—200212)；金银花药材(湖北省药材公司购进)，经湖北中医学院药学院生药学教研室吴和珍副教授鉴定为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb．的干燥花蕾； 乙腈，磷酸均为分析纯；水为双蒸水(本实验室自制)。

2 方法与结果

2．1金银花样品溶液的制备

取金银花药材，加适量水煎煮，煎煮液在60~C下浓缩至相对密度1．2(相当于原生药2．22g·mL )，加乙醇至含醇量为70％ ，静置24h，滤过，回收乙醇，浓缩至滤液体积的1／5，将醇沉浓缩滤液(相当于原生药1．85g·mL )加水稀释5倍后(相当于原生药0．37g·mL )，即得金银花样品液。

2．2绿原酸含量测定

2．2．1色谱条件 色谱柱：Kromasil C 8柱(250mm×4 6mm，71xm)；柱温：25oC；流动相：乙N-O．4％磷酸(12：88)；流速：1mL·min ；检测波长：327nm。

2．2．2标准曲线的制备 精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50％ 甲醇制成每1mL含35．8 g的对照品溶液，精密吸取对照品溶液2，4，6，10，14，181~L，分别注入液相色谱仪。按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值(A)对进样量进行回归，得回归曲线方程Y=2 468．4X一16．205，r=0．999 6。结果表明，绿原酸在0．071 6～0．644 41xg与峰面积呈良好的线性关系。

2．2．3样品溶液含量测定 精密吸取样品溶液1mL置100mL 容量瓶中，双蒸水定容， 摇匀，过0．45 m微孔滤膜，精密吸取续滤液10txL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件用峰面积值外标法计算样品液中绿原酸的含量。

2．3绿原酸与酸共热的稳定性考察

在酸性条件下，具有酚羟基结构的绿原酸以分子状态存在，可以凭借范德华力与树脂发生物理吸附作用，因此随着样液酸度的增加，树脂的吸附容量逐渐增加 [2]，但是由于绿原酸本身的不稳定性[3]，其与酸共热易分解，考虑到使用大孔树脂纯化绿原酸时需对树脂洗脱液进行加热浓缩，以回收洗脱溶剂，因此需对绿原酸与酸共热时的稳定性进行考察，以确定合适的上样药液pH值。取3份50mL的金银花样品原液(pH=4．13)置于锥形瓶中，分别调pH值为1，2，3，放人60~C水浴2h后，测定样品液中绿原酸的含量，与原样品液中绿原酸的含量进行比较，计算绿原酸的损失率，由此分别为14％ ，13％ ，11％ 。由此可见，调药液pH：3时，绿原酸损失较小。

2．4不同树脂动态吸附量的考察

取5种型号的大孔树脂各25g，湿法装柱，将金银花样品液以1BV·h-1的流速分别上样，按树脂体积收集流出液，测定流出液中绿原酸的含量，当流出液中绿原酸的含量达到样品液中绿原酸含量的10％ 时，即为吸附终点，计算树脂吸附量。并将金银花样品液调至pH=3，再分别上这5种大孔树脂柱，考察酸性条件下这5种大孔树脂对绿原酸的吸附量，结果见表1。

结果可见，大孑L树脂在药液调成酸性条件下对绿原酸的吸附效果要优于原药液，且D一101树脂对绿原酸的吸附量较小，不宜作为绿原酸的吸附树脂。

2．5不同树脂动态解吸附率考察

根据酸性条件下4种树脂对绿原酸的吸附量，将金银花样品液调至pH=3，分别取50mL上装有25g LS．300、LS．303、LS-45大孑L树脂柱，另取60mL上装有10g XDA-5大孔树脂柱，均以30％ 乙醇洗脱 J，至洗脱液中检测不出绿原酸为止。按树脂体积收集洗脱液，测定洗脱液中绿原酸的含量并计算解吸附率，结果见表2。

由结果可见，LS-303树脂解吸附率较好。

2．6不同树脂对绿原酸纯化效果的考察

将解吸附率试验中的洗脱液在60℃浓缩、真空干燥至恒重，测定干膏中绿原酸的质量分数，结果见表3。

由结果可见，LS．303大孑L树脂对绿原酸的纯化效果较好。

3 讨论

树脂筛选需综合考虑多种因素，吸附量、解吸附率都只是考察因素之一，吸附量或解吸附率大都不能表明树脂的纯化效果好，因此必须进行动态试验以考察树脂的纯化效果才能筛选出合适的树脂。大孔树脂具有操作简便、树脂再生容易、耗费有机溶剂少、提取率高等特点。本实验表明LS．303大孔树脂对绿原酸的解吸附率达90％ 以上，提取物中绿原酸的含量能达20％ 以上，可用于绿原酸的工业化生产，有利于金银花相关产品的开发。旺圈

参考文献

[1]高春荣，胡锦蓉，孙君社．金银花中绿原酸的提取工艺[J]．中国农业大学学报，2003，8(4)：5—8．

[2]马希汉，王冬梅，苏印泉．大孔吸附树脂对杜仲叶中绿原酸、总黄酮的分离研究[J]．林产化学与工业，2O04，24(3)：47—51．

[3]邓良，袁华，喻宗沅．绿原酸的研究进展[J]．化学与生物工程，2005，(7)：4_6．

产品链接：

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