余建平 林燕 滕莉丽 王科军

（赣南师范学院化学与生命科学系，江西赣州，341000）

摘要：采用微波法提取了金银花中的绿原酸，所制得的绿原酸粗产品用石油醚脱色、薄层层析分离和紫外分光光度计测定含量，并与超声波法、水提法进行了比较。实验结果表明，微波法在提取金银花的绿原酸中具有非常好的效果，筛选的最佳微波工艺条件是：微波功率260W，样品预浸时间24hr，辐射时间15min。在此条件下，与水提法相比总收率提高了10.59%，提取时间缩短75%；与超声波提法相比总收率也提高了2.60%，提取时间缩短了50%。且该方法具有操作简单、快速高效、节能环保等优点。

关键词：微波法水提法超声波法金银花绿原酸

金银花［1］（Flos Lonicerar）为忍冬属忍冬植物的干燥花蕾，是中医常用药，具有清热解毒，凉风散热，抗病毒，保肝利胆的功能。它的主要活性成分为绿原酸。我国作为金银花产地，在金银花炮制、有效成分分析、含量测定等方面取得了很好的研究成果［2］。对金银花这一清热解毒中药的研究处于世界领先地位。金银花中绿原酸的提取方法有：水提法、乙醇回流法、水提醇沉法、酶解法、超声波法等［1 - 5］。本文将在天然产物提取方面具有被提取活性物质不被破坏、快速高效的微波［6］新型提取技术应用于金银花中绿原酸的提取研究，着重探讨了浸泡时间、微波功率、辐射时间对金银花中的绿原酸提取率的影响，并用薄层层析—紫外分光光度法［3 - 4］测定绿原酸的含量，且与超声波提取法、水提法作了比较。

1 实验部分

1.1 仪器与药品

微波反应器：三乐牌W - 650 型，南京陵江科技开发公司；旋转蒸发仪：上海生申科技公司，紫外灯；分析天平：CG - 328 型；紫外可见光分光度计：722 型，上海精密科学仪器有限公司分析仪器厂；循环水真空泵：SHZ-Ⅲ型，上海仪表供销公司；活化的硅胶G 板（自制）；金银花：赣州医药公司；石油醚，乙酸乙酯、甲酸、乙醇、绿原酸均为分析纯，上海试剂公司。

1.2 水提法提取

为了与微波法相比较，先用水提法提取金银花中的绿原酸，具体步骤为：将6.0g 干燥并粉碎的金银花粉末与100mL 蒸馏水置250mL 蒸馏瓶中在80℃的水浴下加热提取1h，重复2 次，将分离的提取液合并，在60℃条件下减压浓缩至10ml 左右，石油醚脱色，使用薄层层析分离，再使用紫外分光光度计进行测定含量。

1.3 超声波法提取

每次用超声波处理提取0.5hr，其它操作同水提法。

1.4 微波法提取

在装有冷凝管的250ml 微波专用容器中装入6. 0g金银花和100ml 蒸馏水，在设定的微波功率和辐射时间下，启动微波炉，提取结束后，合并3 次分离提取液，其它实验操作同水提取法。

1.5 绿原酸的分离

本实验采用硅胶吸附薄层层析进行分离，即将样品点于活化的硅胶G 板上，以乙酸乙酯：甲酸：水= 10：2：3（质量比）展开，紫外灯下观察有蓝色斑点的为绿原酸，刮下斑点，用80%乙醇洗脱，洗脱液定容至5ml，于330nm 处观测吸收值，Rf = 0. 65。用标样进行吸收值的测定，确定绿原酸提取液的最大吸收波长，并计算出相应含量。

1.6 标准曲线的绘制

利用高精度分析天平，称取绿原酸标准品0.0044g，溶于25ml 蒸馏水中，然后利用该母液配成各种标准浓度，用722 型紫外可见分光光度计330nm 下测定不同浓度绿原酸的吸光度，结果如表l。

依据此标准曲线可得回归方程式Y = A + BX 

式中：A = 0.12833 B = 0.02272

X—绿原酸的浓度（μg / ml），Y—吸光度。根据表1数据绘得图1。

1.7 样品液中绿原酸的含量测定

经脱色、薄层层析分离的提取，用80%乙醇（加2%抗氧化剂a）洗脱，并定容至25ml，用lmL 石英检测池在紫外分光光度计上于220 - 520nm 范围内扫描测得样品液与标准液最大吸收波长相同，均为330nm。再在330nm 处测定样品液吸收值，查标准曲线，算出百分含量。

2 结果分析

2.1 水提法产品收率

平行做三次水提取实验，总收率为11.37%。

2.2 超声波提取法产品收率

平行做三次水提取实验，总收率为19. 06%，与水提法相比提高7.69%。

2.3 微波提取法各种因素对产品收率的影响

2.3.1 样品预浸泡时间对产品收率的影响

在其它条件相同的条件下，作者对样品进行不同时间的预浸泡，然后按1. 4 方法提取。实验结果见表2。

从表2 可见，预浸泡时间越长，收率越大，但超过24h，差异很小，所以本实验最佳预浸泡时间为24h。

2.3.2 微波辐射时间对产品收率的影响

在其它因素不变的条件下，作者改变辐射时间，考察不同辐射时间对样品提取收率的影响，实验结果见表3。

从表3 可知，微波辐射时间越长，收率越大，但15min 后的变化很小，所以微波辐射时间选择为15min为最佳。比水提法的时间缩短了75%，超声波提法的时间缩短50%。

2.3.3 微波功率对产品收率的影响

其它条件相同，作者只改变微波功率考察对产品收率的影响。结果见表4。

从表4 可见，随着微波功率的增大产品收率在增大，但超过260W 后增大很小。故微波功率以260W 为最佳。

2.3.4 最佳微波条件重复提取的产品收率

在最佳微波条件下重复提操作取实验，其结果见表5。

从表5 可得，微波方法在相同水平提取金银花中的绿原酸实验的重复操作的稳定性好，而3 次以后金银花中绿原酸的提取基本完成，最好的总收率可达21.66%，比水提法的11. 37%提高了10. 59%，超声波法的19.06%提高了2.60%。由此说明微波方法提取金银花

中的绿原酸是一种比较理想的方法。

3 结论

3.1 利用微波方法提取了金银花中的绿原酸，其最佳工艺条件为：微波功率260W，样品预浸时间24hr，辐射时间15min。

3.2 与水提法相比总收率提高了10. 59%，提取时间缩短75%；与超声波提法相比总收率也提高了2.60%，提取时间缩短了50%。且该方法具有操作简单、节能清洁和快速高效等优点。是一种提取金银花中绿原酸的环境友好的先进方法。

参考文献

［1］郑敏燕. 超声波法提取紫丁香中丁香油的研究［J］. 青海师范大学学报，2003，（3）：32 - 33.

［2］林丹，赵国玲，刘佳佳. 金银花不同提取方法的绿原酸比较研究［J］. 天然产物研究与开发，2003，15（2）；124 - 125.

［3］蔡霄英，刘永乐. 金银花中绿原酸的分离与测定新方法［J］.食品科技，2003，（5）：104 - 106.

［4］武雪芬，景小琦，李国茹。金银花中药用成分的提取及抑菌试验［J］，天然产物研究与开发，2001，13（3）：43 - 44.

［5］尹波，王科军. 超声波法提取金银花中的绿原酸［J］. 林产化工通讯，2005，（1）：16 ～ 1 8

［6］周瑾，闫小燕，贺高江等. 微波提取银档黄酮苷的方法研究［J］. 天然产物研究与开发，2001，14（1）：42 - 44.

产品链接：

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