田澍，顾学芳，张其平，张跃华

（南通大学化学化工学院，江苏南通226O07)

摘要：采用甲醇超声提取，液相色谱分离的方法测定化妆品中熊果酸的含量。色谱条件为：Agilent HC—Cl8(250 mm×4．6 mm，5um)色谱柱，流动相V(甲醇)：V(水)：V(冰乙酸)=87：13：0.03，流速1．0 mL／min，紫外检测波长215nm。结果表明，在此条件下熊果酸在0.2 ug／ml~103ug／mL与相应的峰面积具有良好的线性关系(r>0.999 7)，线性回归方程为Y=25.367 5x+0.546 9，回收率在96．4％ ～101．3％，方法精密度RSD<3．6％。

关键词：化妆品；熊果酸；高效液相色谱法

熊果酸(uA)，又名乌索酸、乌苏酸，属于口一香树脂醇型五环三萜类化合物。主要分布在女贞子、山楂、白花蛇舌草等植物中，以游离形式或结合成糖苷存在。其药理活性表现在免疫增强、降血糖、抗病毒和抗肿瘤等方面。随着研究的深入，熊果酸的抗氧化性在美容护肤品等方面的应用被逐渐开发。作为化妆品，熊果酸性质稳定，颜色和气味不随时间改变，而且有很好的触摸感。日本在1983年一2004年的有关熊果酸的29篇专利中，有l0篇是关于熊果酸的皮肤美容保健方面的应用，熊果酸及其盐或衍生物能作为蛋白酶抑制剂，能有效预防和治疗皮炎、皮肤粗糙、干燥等；熊果酸及其衍生物能抗紫外线、改善和恢复真皮胶原纤维束结构，起到美白和防皱作用。然而我国目前对仅在高档化妆品中添加的熊果酸在质量控制上尚缺乏统一标准，2005版药典采用的薄层扫描法测定的其实为熊果酸和其同分异构体齐墩果酸(OA)的总含量。作者比较了3种不同色谱柱对UA的分离效果，建立了反相高效液相色谱法测定化妆品中熊果酸含量的方法，并对市场上不同品牌中高档化妆品中UA的含量进行了测定，为建立化妆品质量标准提供参考。

1 实验部分

1．1 仪器与试剂

Agilent 1100高效液相色谱仪(紫外检测器)， Agilent色谱仪器公司；超声波清洗仪，上海医用仪器厂；Mettler AE 240分析天平(1／100 000天平)，梅特勒一托利多(上海)仪器有限公司。熊果酸，99％，中国药品生物制品鉴定所；甲醇，色谱纯，美国Tedia公司；其余试剂均为国产分析纯。

1．2 色谱条件

色谱柱：Agilent HC—C18(250 alla×4．6mm，5／um)，Agilent ZORBAX Eclipse XDB—Cl8(250 mm×4．6 mm，5／um)，Agilent TC—Cl8(250mm×4．6 mm， 5／um)；进样量20ul；流动相为V(甲醇)：V(水)：V(冰醋酸)=87：13：0．03，流速为1．0 mL／min；紫外检测波长为215nm。

1．3 标准溶液和样品溶液的配制

精密称取熊果酸标准品1．23 mg置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀，配成质量浓度为123ug／ml的溶液。

精确称取化妆品试样约1.000 g于具塞锥形瓶中，加甲醇10 mL，超声提取40 min，离心分离，取上清液以0.45／um滤膜过滤，转移至50 mL容量瓶中，甲醇定容[1]。

2 结果与讨论

2．1 色谱条件的选择

经紫外全波长扫描，熊果酸甲醇溶液λmax=206 nm，在此检测波长下，流动相中甲醇的紫外吸收干扰较大，基线不稳，故选择215 nm为检测波长。

鞠建华等[2]采用甲醇一水一磷酸(体积比为90： 10：0．05)流动相体系，王向红等 3采用乙腈一甲醇一水一磷酸(体积比为80：10：10：0.05)流动相体系，均可实现基线分离。经重复试验，二者在保留时间，理论塔板数上的差别不大。考虑到经济、操作等因素，采用基于甲醇一水的流动相体系。添加少量醋酸以创造弱酸性条件(调节pH=4．O)，有利于分离，同时可以改善峰形，并且以醋酸为添加剂时熊果酸保留时间小于以正磷酸为添加剂时保留时间。乔非等[4]还利用三乙胺作为扫尾剂改善峰形(在作者所选用的色谱柱系统中未能起到明显的作用)。作者选取流动相为甲醇一水一醋酸体系(体积比为87：13： 0.03)。

取同一标准溶液，按以上色谱条件，流速1．0 mL／min分别进样，得到熊果酸在3种不同色谱柱下的色谱结果，记录保留时间、柱效。结果表明， HC—C18色谱柱理论塔板数为14 563，保留时间为l6．35 min，柱效明显高于其他两根色谱柱，只是保留时间稍长，ZORBAX Eclipse XDB—C18色谱柱保留时间最短，仅为11．65 min，但其柱效也最低，塔板数仅为10 346。根据色谱柱资料，TC—C18柱碳载量为l2％，ZORBAX Eclipse XDB—C18柱碳载量为lO％，而HC—C18柱碳载量为18％，说明高表面积和更高的碳载量能使赋形剂和溶剂峰与待测组分色谱峰更好的分离。故选择HC—C18柱，它能更好地符合分析要求。Agilent HC—Cl8色谱柱采用1．2色谱条件，图谱见图1。

2．2 线性关系

精密吸取标准溶液0．1 mL、0．2 mL、0．3 mL、0．4 mL、0．5 mL和1．0 mL，分别置于1 mL容量瓶中，甲醇定容。所得溶液质量浓度分别为l2.30 ug／ml、24.60 ug／ml、36.90 ug／ml、49.20 ug／ml、61.50 ug／ml和123.00 ug／ml，按1．2色谱条件测定。每份对照液测定5次，取峰面积平均值，得线性回归方程为y=25.367 5x+0.546 9，线性范围为0.2 t,g／mL～103ug／mL，r=0．999 7，熊果酸标准曲线见图2。

2．3 精密度及回收率实验

取49．20 ug/mL标准溶液，补充进样3次，共8次，所得结果平均值为48.43ug/mL，计算RSD=1．56％。精密量取熊果酸质量浓度为l0.13 ug/mL供试液2 mL，定量精确加入标准溶液(24.60ug/mL)0．2 mL、0．4 mL、0．6 mL及1．0 mL，使用与样品相同的方法制备和测定，取5次测定平均值计算回收率，回收率在96．4％ ～101．3％，结果见表1。

以上测定结果表明，该方法具有良好的精密度、重现性和稳定性。

2．4 样品测定

将市场上收集到的l0种中高档美白护肤产品进行熊果酸相对含量的测定，部分测定结果见表2。

从对市场上中高档的美白化妆品的测定结果可以看出，只有少部分化妆品中含有熊果酸，表明目前化妆品中有较少品种添加该成分。作为一种新型、天然的美白成分，日本企业在开发上超过了欧洲，开发出系列化妆品，在这一点上，国内众多大型化妆品生产企业还有很大的发展空间。

3 结论

采用高效液相色谱法测定化妆品中熊果酸含量，方法保留时间小于17 min，在0．2ug／mL～103ug／mL与目标物峰面积具有良好的线性关系，回归系数达到0．999 7，回收率在96.4％ ～101.3％，测定结果稳定可靠，可为化妆品生产过程的质量控制及建立相关标准起到一定的参考作用。

参考文献：

[1]李洁，王超，武婷，等．高效液相色谱法测定化妆品中三种香豆素的含量[J]．日用化学工业，2006，36(4)：257—259．

[2]鞠建华，周亮，郑瑞霞，等．高效液相色谱法测定中药枇杷叶中熊果酸的含量[J]．中国药学杂志，2003，38(9)：657—659．

[3]王向红，崔同，齐小菊，等．HPLC法测定不同品种枣及酸枣中的齐墩果酸和熊果酸[J]．食品科学，2002，23(6)：137—138．

[4]乔非，马双成，林瑞超，等．回心草药材中熊果酸的研究[J]．药物分析杂志，2004，24(2)：208—210．

产品链接：

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