郭汉华   朱涛   肖佳尚

急性咽炎合剂为复方中药验方制剂，是由猫爪草、牛蒡子、荆芥、蝉蜕、鱼腥草、土牛膝、金银花、北杏、芦根、甘草组成。广州市黄埔区中医院采用现代制药新工艺，研制出了本合剂，在临床中应用多年，证明其有很好的疗效。为了有效地控制本品的各种中药成分，优化制剂的质量，保障患者用药安全有效。确定质量标准中以其主要成分绿原酸为含量测定指标，采用高效液相色谱法(HPIC)测定本品中绿原酸的含量[1]。

1 仪器与试药

1．1 仪器：高效液相色谱仪：岛滓LC一10A泵(日本产)，手动进样器，紫外线检测器：N2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息研究所)；Mettler AE245天平(十万分之一)，梅特勒一托利多上海仪器有限公司：美国Simplicity185超纯水机(美国生产)。

1．2 试药：绿原酸对照品(由中检所提供，批号：110753—200413)；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯；成品样品(批号为07104、07108、07124)及阴性对照品(由广州市黄埔区中医院提供)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件的选择：色谱柱：Diamonsil C18，5 I．Lm，200mmx4．6 mm(迪马公司产)；流动相：乙腈一0．1％磷酸(1 1：89)；柱温28℃：流速1 ml／min：检测波长：327 nm。在此色谱条件下，绿原酸与样品中其他组分分离良好，理论板数按绿原酸对照吕峰计>3000。

2．2 对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 ml含0．1 mg的溶液，摇匀，即得。

2．3 供试品溶液的制备：精密量取本品0．5 ml，置10 ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2．4 空白试验：精密吸取缺金银花的阴性样品，按供试品溶液制备方法操作，依样进样测定，记录色谱图。结果，在对照品相同保留时间处无吸收峰。表明样品中无干扰绿原酸的成分存在。

2．5 线性关系的考察：精密称取绿原酸对照品11．15 mg，置10 ml量瓶中．加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀．分别精密吸取0．1、0．2、0．5、1．0、2．0 ml，分别置10 ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度．得不同浓度的绿原酸对照品溶液；精密吸取上述对照品溶液各20 l，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定绿原酸峰面积，以对照品进样量x(ug)为横坐标、峰面积值Y(mV·s)为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表1。

测定结果表明，绿原酸对照品在进样量0．223—2．23 范围内呈良好的线性关系。

2．6 精密度试验：精密吸取上述第3的对照品溶液20 l，重复进样5次，测定、记录峰面积，求得平均峰面积为2 168 914．05，相对标准偏差(RSD)为0，4％。结果说明本法精密度良好。

2．7 稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液(批号：070104)，在室温下，分别配制后0、1、4、12、24 h进行绿原酸峰面积测定，每次进样20 l，测定。求得平均峰面积为2 288 724．975，RSD为1．2％。结果表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2．8 重珊陛试验：精密称取样品5份(批号：070104)，按供试品溶液制备方法操作，依法进样测定，计算含量，求RSD。结果表明，本法测定具有良好的重现性，结果见表2。

2．9 回收率测定：采用加样回收法，精密称取已知含量的同一批号样品(批号：070104)(绿原酸含量为0．601 mg／m1)约1 ml，置10ml量瓶中．精密加入对照品溶液(浓度为1．115 mg／m1)0．5 m1．加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。按正文方法，进样、测定、计算。结果表明，本法具有较好的回收率。结果见表3。

2．10 样品测定：取本品3批，照供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取供试品溶液20 l，按上述色谱条件测定，计算样品中绿原酸的含量。样品含量测定，制备的样品溶液绿原酸含量0．569 mg／ml (批号070104 )，0．443 mg／ml(批号070104)，0．437 mg／ml(批号070124)。

3 讨论

3．1 供试品溶液的制备：由于绿原酸类成分在含水的醇中溶解度比较大．因此我们在提取时选用含水50％的甲醇处理提取，以去除过多的中药杂质，避免过多的杂质峰干扰测定，经回收试验证明方法可行。

3．2 检测波长的选择：用紫外检测器对样品与对照品的绿原酸的色谱图进行检测，绿原酸在327．2 nm有最大吸收，在该波长处测定，各组分分离良好，其他杂质的干扰少，满足含量测定的要求。此外我们用紫外检测器考察了色谱图中绿原酸的纯度，确定其中不含杂质峰。

3．3 流动相的选择：HPLC测定选择了乙腈一0．1％磷酸(11：89)，乙腈一0．2％磷酸(30：70)，甲醇一0．1％磷酸(40：60)几种流动相体系，通过比较分离情况，确定了上述体系，该体系使各成分得到了较好的分离，满足了定量的要求。

参考文献

1 余继英．何林，胡远．等．抗病毒口服液的质量标准研究．中国药房，2006，17(2o)：1576．