薛漓(广西梧州药品检验所，广西梧州543002)

摘要：目的建立痔疮片中大黄素和大黄酚的含量测定方法。方法 高效液相色谱法。Kromarsil C-s柱，甲醇-o．1 磷酸液(90：10)为流动相，流速为lmL／min，检测波长254nm。结果痔疮片中大黄素和大黄酚能有效分离，且无杂质干扰。大黄素进样量在0．046~0．230~g，大黄酚进样量在0．100~0．500btg，均呈良好线性关系，r=O．9998。大黄素和大黄酚平均回收率分别为99．7 和96．1 (n=5，RSD分别为l_1 和1，9 )。结论本法准确、可靠。可作为痔疮片的质量控制方法。

关键词：痔疮片；大黄素；大黄酚；高效液相色谱法

痔疮片由大黄、白芷、蒺藜、功劳木等六味中药组成。具有清热解毒、凉血止痛等功效，用于各种痔疮、肛裂、大便秘结。已收载于国家药品标准。但现行质量标准仅有TLC鉴别而无含量测定指标。为了更好地控制药品质量，我们选取本品中大黄的代表成分大黄素和大黄酚作为质控指标，对其含量测定方法进行了研究，为进一步完善其质量标准提供了参考依据。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：Waters 501泵，484检测器，U6K进样器，SP4290积分仪。

大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：756—9023，大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0796—9404)，甲醇、磷酸等溶剂均为分析纯。

痔疮片(广西梧州市玉兰药厂，批号：990504，980806，990705，990403，970301)。

2 色谱条件

色谱柱：Kromarsil Cl8(250mmX 4．6mm)。大连化学物理研究所。流动相：参照中国药典三黄片中大黄的测定条件调节比例，甲醇一0．1 磷酸(90：10)，流速：lmL／min，检测波长：254nm。

系统适用性试验：按上述条件，理论塔板数按大黄素峰计算为5 300，按大黄酚峰计算为5 500，二者的分离度为4．9，连续进样5针，大黄素和大黄酚峰面积的RSD均为0．5 0A。

3 对照品及供试品的制备

对照品溶液的制备：分别精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加无水乙醇一醋酸乙醋(2：1)制成每lmL含大黄素0．Olmg，大黄酚0．025m_g的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品2O片，除去糖衣，精密称定，研细(过三号筛)，精密称取适量(约相当于2片)置锥形瓶中，精密加乙醇25mL，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液10mL，置烧瓶中，水浴蒸干，加3O 乙醇一盐酸(10：1)溶液15nlL，水浴加热水解1h，立即冷却，置分液漏斗中，加氯仿强力振摇提取4次，每次15mL，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣用无水乙醇一醋酸乙酯(2：1)溶解，移入25mL量瓶中，并稀至刻度，摇匀，微孔滤膜(O．45~m)滤过，取续滤液即得。另取不含大黄的阴性样品适量，同法制成阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果表明阴性对照品无干扰。

4 检测

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，以峰面积外标法计算含量，即得。

5 线性关系考察

精密吸取对照品溶液4，5，7．5，1O，15，20ul，分别进样分析，测定峰面积，以峰面积值为纵坐标，对照品进样量为横坐标，作线性回归，得回归方程，大黄素Y=98．813X—10．807；大黄酚Y=1．990X+146．334；r=0．9998，结果表明，大黄素在0．04610．230ug，大黄酚在0．100~0．500ug内呈良好的线性关系。

6 精密度试验

取同一批号样品的供试液，重复进样5次，测定，峰面积值分别为：大黄素164，170，167，166，166，平均值：166．8，RSD=1．3 ；大黄酚485，490，489，489，487，平均值：487．8，RSD=0．4 ，精密度良好。

7 稳定性试验

取同一批号的供试品液分别在2，5，1O，15h进行测定，结果表明在15h内基本稳定(RSD=1．5 )。

8 重现性试验

取同一批号的样品，分别取样5份，按供试品溶液制备方法制备，进样，测定，结果(mg／g)：大黄素0．205，0．201，0．203，0．207，0．209，平均值：0．205，RSD=1．6 ；大黄酚0．822，0．828，0．823，0．831，0．802，平均值：0．821，RSD=1．4 ，表明本方法重现性良好。

9 加样回收率试验

精密称取已测定含量的样品(tit号：970301)约0．4g，精密加入适量大黄素和大黄酚对照品，按含量测定方法测定，计算回收率，5次实验结果分别为(％)：大黄素99．7，100．9，99．2，100．6，98．2，平均回收率99．7 ，RSD=1．1 ；大黄酚94．7，98．9，96．8，94．3，96．0，平均回收率96．1 ，RSD=1．9 。

1O 样品测定

取样品5批，按上述方法测定含量，结果见表l。表1 样品测定结果( %,n=2)

11讨论

大黄作为痔疮片的主药之一，已知其主要有效成分为蒽醌类，其中又含结合蒽醌和游离葸醌。为了便于测定，本实验参照三黄片的含量测定方法，把结合蒽醌水解后测定其苷元大黄素和大黄酚。实验证明，三黄片含量测定的提取、水解及HPLC条件也适合于本品的含量测定。从所测5批样品结果看，其含量相差较远，可能主要与大黄原料的质量不同有关。至于其生产工艺对含量有何影响，生产中其葸醌的提取率如何，产品含量限度指标的合理制定等，还有待于进一步研究。为了更好地控制痔疮片的质量，建议修订本品的质量标准，增加大黄葸醌的含量测定项目。

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