大黄素对家兔实验性皮肤创伤的促愈合作用及其机制 | 大黄素对家兔实验性皮肤创伤的促愈合作用及其机制 |
| 发布时间:2010-11-06 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:4778 |
唐 甜，杨 静 （武汉大学医学院药理学系，湖北武汉 ４３００７１） 摘要：目的 探讨大黄素治疗皮肤创伤的可能性及其作用机制。方法 采用家兔皮肤切除伤创伤模型，同时滴加绿脓杆菌或金黄色葡萄球菌。大黄素（１００～２００μｇ·ｇ－１）敷于创面，每天１次，连续７ｄ或１４ｄ。观察创面面积、创面细菌数量和病理组织学改变。生化测定创面组织蛋白和羟脯氨酸（ＯＨＰ）含量；免疫组化ＳＰ法检测转化生长因子（ＴＧＦ-β１）含量；逆转录聚合酶链反应测定ＴＧＦ-β１ｍＲＮＡ表达；Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析Ｓｍａｄ２，３，４和７表达。结果 大黄素（１００～２００μｇ·ｇ－１）随药物剂量面表面细菌数；创面组织蛋白和羟脯氨酸的含量也随着剂量的增加而增加。病理结果显示，大黄素２００μｇ·ｇ－１明显促进创面炎性渗出物吸收、肉芽组织形成和表皮增生。随大黄素浓度的增加，与基质对照组相比，ＴＧＦ-β１基因和蛋白的表达逐渐增高，均有显著差异；对Ｓｍａｄ４蛋白表达无影响，大黄素１５０和２００μｇ·ｇ－１使Ｓｍａｄ７蛋白表达降低；大黄素２００μｇ·ｇ－１使Ｓｍａｄ３和Ｓｍａｄ２表达增加，其他剂量则无影响。与ｒｈＥＧＦ组相比，大黄素１００和（或）１５０μｇ·ｇ－１组使Ｓｍａｄ２和Ｓｍａｄ３表达明显下降。结论 大黄素促进实验性皮肤创面的修复，其机制可能与ＴＧＦβ１和Ｓｍａｄｓ信号转导通路有关。 关键词：大黄素；创伤愈合；转化生长因子β；蛋白，Ｓｍａ 外科创伤、烧伤，以及疖、疔、疮疽、褥疮等疾病是临床常见病。创面感染是皮肤创伤愈合延迟的主要原因之一，有效控制创面感染和促进创面愈合是皮肤创伤治疗的重要环节。祖国医学认为大黄外用“清血热、破瘀血、消肿痛和祛瘀生新”，是治疗皮肤创伤的传统药物。大黄素（ｅｍｏｄｉｎ），１，３，８三羟基６甲基蒽醌，是中药大黄的主要有效单体，具有抑菌、抗炎、抑制血小板聚集和改善微循环等［１］药理作用。但大黄素对皮肤创伤的影响国内外尚未见报道。本实验采用家兔皮肤切除伤模型，研究大黄素对实验性皮肤创伤的促愈合作用及可能机制。 １ 材料与方法 １．１ 动物与菌株 新西兰白兔，体重２．２ ～２．５ｋｇ，♂♀各半，由武汉大学实验动物中心提供。许可证号ＳＣＸＲ（鄂）２００３０００４。致病性金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌由武汉大学中南医院临床分离并保种。 １．２ 试剂与仪器 大黄素，纯度≥９８％，批号０３０４０１，由辽宁生物医药科技有限公司提供。１００，１５０和２００μｇ·ｇ－１的大黄素软膏由本室配制。软膏基质，成分为凡士林，由马应龙药业集团股份有限公司提供。创灼膏，成分为炉甘石、白及、石膏、冰片、甘石膏（由苍术、木瓜、防己、黄柏、延胡索、郁金、虎杖、地榆、炉甘石制成）粉，由北京九发药业有限公司提供，批准文号国药准字Ｚ１１０２０２８７。重组人表皮生长因子（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｒｈＥＧＦ）衍生物，２×１０６Ｕ·Ｌ－１，由深圳华生元基因有限公司提供，批准文号国药准字Ｓ２００１００３８。即用型鼠抗兔转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦβ１）单克隆抗体、ＳＰ通用型免疫组织化学试剂盒、３，３二氨基联苯胺（ＤＡＢ）显色试剂盒及多聚赖氨酸购于北京中山生物技术有限公司。Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒购自上海华舜生物工程有限公司；逆转录试剂盒为ＭＢＩ产品；ＰＣＲ相关试剂为大连宝生物工程的ＴａＫａＲａ产品；Ｓｍａｄ蛋白抗体购自ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＵＳＡ）；ＥＣＬ反应试剂盒购于Ａｍｅｒｓｈａｍ公司；其他试剂均为国产分析纯。 １．３ 家兔皮肤创伤模型［２］ ①单纯创伤模型：家兔背部创伤后，创面不滴加细菌的动物模型；②细菌感染模型：家兔背部创伤后，创面滴加金葡球菌或绿脓杆菌的创面感染细菌动物模型。 模型①：取健康家兔，背部用１０％硫化钠脱毛，以硫喷妥钠３０ｍｇ·ｋｇ－１耳缘静脉注射麻醉，以碘酒消毒皮肤后用面积２．４５ｃｍ２钢质打孔器在家兔背部脊柱两侧各２ｃｍ处，自上而下切割６个圆形创面，孔间距离２．５ｃｍ，深至皮下，止血后备用；模型②：切割致伤后即刻在创面滴加金葡球菌或绿脓杆菌０．１ｍＬ，滴加１次，浓度分别为１×１０１１Ｌ－１和５×１０１０Ｌ－１。２４ｈ后动物伤口出现红、肿及脓性分泌物，从创面组织分离出金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌，表明感染创面制备成功。 １．４ 实验分组与处理 将１８只家兔随机分成３大组：单纯创伤组，创伤后不滴加细菌；金葡球菌组，创伤后滴加金葡球菌；绿脓杆菌组，创伤后滴加绿脓杆菌。每大组均分为６小组，每小组１只家兔，每只家兔６个创面。空白对照组，不涂药；软膏基质组，涂软膏基质１．０ｇ；细菌感染组阳性对照均涂创灼膏１．０ｇ，单纯创伤阳性对照喷涂ｒｈＥＧＦ０．１ｍＬ（２００Ｕ）；大黄素组，涂１００，１５０和２００μｇ·ｇ－１大黄素软膏各１．０ｇ。创伤加滴加细菌处理的当天为ｄ０，次日（ｄ１）给药，每天换药１次。细菌感染组连续给药１４ｄ，单纯创伤组连续给药７ｄ。切口创面首先以无菌凡士林油纱布覆盖，再覆盖消毒纱布，胶布固定。每只家兔６个圆形切割创面分别为空白对照组、软膏基质组、阳性药对照组及大黄素软膏３个剂量组。 １．５ 创面愈合的测定 采用透明膜描记法计算创面愈合百分率［３］。创面愈合百分率＝〔（同组ｄ０创面面积－同组ｄｎ时创面面积）／同组ｄ０创面面积〕×１００％（ｎ为用药后测量时间）。细菌感染组于ｄ３，ｄ６，ｄ９，ｄ１２和ｄ１４；单纯创伤组于ｄ３，ｄ５和ｄ７比较用药后伤口愈合率的变化。 １．６ 痂下组织细菌数测定［４］ 于ｄ１，ｄ６和ｄ９分别取细菌感染组痂下组织，进行菌落数测定。每克组织的细菌数（ｃｆｕ·ｇ－１）＝（菌落数×稀释倍数×１／０．０１）／组织重量（ｇ）。 １．７ 创面肉芽组织蛋白与羟脯氨酸含量测定 取伤后ｄ７单纯创伤组创面肉芽组织。氯胺Ｔ氧化法测定羟脯氨酸含量［５］，Ｌｏｗｒｙ等［６］法测定肉芽组织蛋白含量。 １．８ 病理组织学观察 于伤后ｄ１５处死细菌感染组，取背部切口创面组织，１０％甲醛固定，常规石蜡包埋切片，ＨＥ染色，光镜下观察创面组织病理学变化。 １．９ ＲＴＰＣＲ半定量分析ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达 １．９．１ 引物设计与合成 ＴＧＦβ１和β肌动蛋白（βａｃｔｉｎ）引物设计参照文献［７］，由上海生物工程公司合成。ＴＧＦβ１ 引物：Ｐ１为５′ＣＡＡＧＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＡＣＡＧＣＡ３′；Ｐ２为５′ＧＡＴＧＣＴＧＧＧＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣ３′，长度４４２ｂｐ；β肌动蛋白：Ｐ１为５′ＡＧＧＡＡＧＧＡＧＧＧＣＴＧＧＡＡＣＡ３′，Ｐ２ 为５′ＣＣＣ ＡＴＣ ＴＡＣ ＧＡＧ ＧＧＣＴＡＣＧＣ３′，长度２６２ｂｐ。 １．９．２ ＲＴＰＣＲ分析ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达 采用Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒提取单纯创伤组创面组织总ＲＮＡ（具体参照Ｔｒｉｚｏｌ说明书），逆转录合成ｃＤＮＡ（参照ＲｅｖｅｒｔＡｉｄＴＭ ＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ说明书），ＰＣＲ反应体系为５０μＬ，扩增条件：９４℃预变性５ｍｉｎ，７２℃时加入Ｔａｑ酶（２Ｕ），然后９４℃，３０ｓ，６１℃，１ｍｉｎ，７２℃，４５ｓ，３５次循环后，７２℃延伸１０ｍｉｎ，终止反应。ＲＴＰＣＲ产物经１．８％琼脂糖凝胶电泳分离并与ＤＮＡ相对分子质量标准（１００ｂｐＤＮＡｌａｄｄｅｒ，Ｇｉｂｃｏ）比较鉴定。用ＵＶＰ公司透射扫描仪进行电泳条带密度定量测定。以βａｃｔｉｎ扩增产物为内对照，计算ＴＧＦ-β１ ｍＲＮＡ表达的相对水平。 １．１０ 免疫组化ＳＰ法测定创面组织ＴＧＦ-β１ 含量［８］ 取单纯创伤组伤后ｄ７创面组织，免疫组化ＳＰ法测定创面组织ＴＧＦ-β１含量。采用ＨＰＩＡＳ１０００高清晰度彩色病理图文报告管理系统分析ＴＧＦ-β１表达量。每只动物的每种处理皮肤切３张切片，每张切片随机选取５个高倍镜视野（×４００），测定每个视野下阳性反应的平均吸光度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。每只动物的每种处理皮肤切３张切片的共１５个视野的平均吸光度、阳性面积率的平均值作为该动物处理的测量值。 １．１１ Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析Ｓｍａｄ２，３，４及７蛋白表达水平［９］ 将伤后ｄ７的单纯创伤组创面组织样品调整到各上样量蛋白至５０μｇ。８％十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）分离蛋白质。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法测定创面组织Ｓｍａｄ２，３，４和７蛋白水平。 １．１２ 统计学处理 所有数据均用ＳＰＳＳ１１．０统计学软件进行处理。结果采用珋ｘ±ｓ表示，比较采用方差分析，组间差异采用两两比较的Ｄｕｎｎｅｔｔｔ检验。 ２ 结果 ２．１ 大黄素对皮肤创面修复的影响 单纯创伤模型组的单纯创伤和基质对照组在观察期间（ｄ３～７），伤口随时间增加愈合率在提高，两组没有差别，说明所造模型有一定的自然愈合能力，基质没有治疗作用。大黄素组和ｒｈＥＧＦ阳性对照组，与基质对照组相比，对伤口的治疗作用随时间的增加而增加。ｄ３时，３个剂量大黄素组和ｒｈＥＧＦ阳性对照组，与基质对照组相比，对伤口的愈合无促进作用。ｄ５时，大黄素２００μｇ·ｇ－１组与基质对照组比，对伤口的愈合有明显的促进作用。ｄ７时，３个剂量大黄素组的创面愈合百分率明显增加，与基质对照组相比有显著性差异。ｒｈＥＧＦ阳性对照组创面愈合百分率变化和大黄素（２００μｇ· ｇ－１）组相似（表１）。 金黄色葡萄球菌感染模型组，大黄素各组随着时间与剂量的增加创面愈合百分率有增加的趋势。除大黄素１００μｇ·ｇ－１（ｄ６）外，基质对照组相比，均有显著性差异。在ｄ９～１４，大黄素剂量２００μｇ·ｇ－１的创面愈合百分率明显高与创灼膏阳性对照组。创灼膏阳性对照组伤口的变化和大黄素（２００μｇ·ｇ－１）组变化相似（表２）。绿脓杆菌感染模型组，大黄素治疗组的伤口愈合情况与金黄色葡萄球菌感染模型组相似（表３）。 ２．２ 大黄素对单纯创伤皮肤组织病理的影响 光镜下可见空白对照组（图１Ａ）的皮肤创面可见含大量炎症细胞的坏死组织，其下组织中也有大量炎症细胞，并可见血管充血；基质对照组（图１Ｂ）的创面也可见大量炎症细胞的坏死组织，其下组织略水肿并有较多炎症细胞；ｒｈＥＧＦ组（图１Ｃ）可见含坏死组织的痂皮脱落，表皮开始向创面生长，其下组织中有一些新生血管；大黄素组（２００μｇ·ｇ－１）（图１Ｄ）皮肤痂皮脱落，创面已由表皮覆盖，其下组织中仅有少量炎症细胞。 ２．３ 大黄素对感染创面痂下组织细菌数的影响
细菌感染组中，空白对照组ｄ６的痂下组织细菌数较ｄ１略有升高，而ｄ９痂下组织细菌数较ｄ１降低，表明随着损伤的恢复，痂下组织细菌会被逐渐清除。在实验观察期间（ｄ６～９），随着大黄素剂量的增加和时间的延长不断减少痂下组织细菌数。创灼膏阳性对照组的作用与大黄素（１５０和２００μｇ·ｇ－１）组变化接近（表４和５）。 ２．４ 大黄素对单纯创伤组皮肤肉芽组织羟脯氨酸及蛋白含量的影响 表６结果可以说明基质对创面肉芽组织羟脯氨酸和蛋白含量没有影响。大黄素随剂量增加而增加单纯创面肉芽组织羟脯氨酸和蛋白含量，与基质对照组相比有明显差别。ｒｈＥＧＦ阳性对照组对羟脯氨酸含量的影响与大黄素２００μｇ·ｇ－１相近；对蛋白含量的作用
好于大黄素１００μｇ·ｇ－１，但不及大黄素２００μｇ·ｇ－１组（表６）。 ２．５ 大黄素对单纯创伤组皮肤创面ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达的影响 大黄素治疗７ｄ后，随药物浓度的增加，ＴＧＦ-β１ｍＲＮＡ的表达逐渐增高，与基质对照组相比均有显著差异，但只有大黄素２００μｇ·ｇ－１组与ｒｈＥＧＦ阳性对照组ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达变化相似（表７，图２）。 ２．６ 大黄素对单纯创伤组皮肤创面ＴＧＦβ１ 含量 的影响ＴＧＦ-β１表达的阳性信号分布于胞浆内呈棕黄色。大黄素组１００，１５０μｇ·ｇ－１创面组织成纤维细胞和巨噬细胞ＴＧＦβ１染色弱阳性，胞浆内可见少量棕黄色颗粒，大黄素组２００μｇ·ｇ－１和ｒｈＥＧＦ阳性对照组ＴＧＦβ１染色强阳性，胞浆内可见密集分布的棕黄色颗粒（图３）。半定量分析结果表明，与基质对照组比，大黄素组和ｒｈＥＧＦ组ＴＧＦβ１含量均明显增加（表８）。 ２．７ 大黄素对单纯创伤模型组创面Ｓｍａｄ蛋白表达的影响 Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹（图４）检测显示，大黄素对Ｓｍａｄ４蛋白表达无影响。与基质对照组比，大黄素１５０和２００μｇ·ｇ－１使Ｓｍａｄ７蛋白表达降低；大黄素２００ μｇ·ｇ－１使Ｓｍａｄ３和Ｓｍａｄ２表达增加，其他剂量则无影响。与基质对照组比，ｒｈＥＧＦ阳性对照组，对Ｓｍａｄ４，Ｓｍａｄ７表达无影响；使Ｓｍａｄ２，３蛋白表
达增加，且与大黄素２００μｇ·ｇ－１组的作用相当。与ｒｈＥＧＦ组相比，大黄素１００和（或）１５０μｇ·ｇ－１组使Ｓｍａｄ２，Ｓｍａｄ３表达明显下降（表９） ３ 讨论 外科创伤、烧伤，以及疖、疔、疮疽、褥疮等疾病是临床上常见的皮肤病。目前，促进创伤修复与组织再生的药物已成为世界性的热门研究课题［１０］。
芦荟大黄素已被证明具有促进创伤修复的作用并已应用于临床［１１］。本实验结果显示，大黄素剂量依赖性促进家兔全层皮肤切除伤创面的愈合百分率，降低感染创面细菌数，明显促进创面炎性渗出物吸收、肉芽组织形成和表皮增生，表明大黄素具有促进创面愈合的作用。这也许是祖国医学认为大黄外用能“清血热、破瘀血、消肿痛和祛瘀生新”的物质基础。创面中胶原和蛋白含量是创面愈合的指标，皮肤缺损主要通过肉芽组织的生长来修复，需要细胞的增殖与蛋白质的合成。肉芽组织生长愈快，蛋白和胶原的含量也就愈高，而羟脯氨酸含量能特异反映组织胶原蛋白含量，因此检测蛋白质、羟脯氨酸的含量可以反映创伤修复中肉芽组织的生长和创面愈合的状况。本文结果大黄素给药组创面蛋白和羟脯氨酸含量明显高于基质对照组，表明大黄素可明显促进创面组织胶原蛋白的合成、加速细胞外基质的 重建。ＴＧＦ-β１是一种多功能的细胞因子，趋化成纤维细胞和炎症细胞向伤口聚集，诱导肉芽组织生长和表皮形成，在促进创伤修复中起重要作用［１２］。ＴＧＦ-β１信号进入细胞浆后使Ｓｍａｄ３和Ｓｍａｄ２磷酸化，与Ｓｍａｄ４形成多聚物，随后，Ｓｍａｄ
ｓ复合物易位至细胞核，在核内激活ＴＧＦβ１ 反应性基因的转录。Ｓｍａｄ２，３为受体调节Ｓｍａｄ；Ｓｍａｄ７抑制受体调节Ｓｍａｄ的信号传导；Ｓｍａｄ４是受体调节Ｓｍａｄ传导信号的伴侣。Ｓｍａｄｓ蛋白介导细胞内ＴＧＦβ１ 信号传递，与ＴＧＦ-β１ 在组织修复中的作用密切相关［１３］。本实验结果显示，大黄素剂量依赖性增加 ＴＧＦ-β１ｍＲＮＡ表达和ＴＧＦβ１ 含量，同时使Ｓｍａｄ２和３蛋白表达增加，Ｓｍａｄ７蛋白表达降低，对Ｓｍａｄ４蛋白水平无明显影响，提示大黄素可能通过增强创面合成与释放ＴＧＦβ１能力，调节ＴＧＦβ１信号传导通路中Ｓｍａｄｓ蛋白水平，调控ＴＧＦ-β１作用靶基因的特异性表达，上调创伤愈合过程中细胞因子水平，从而提高创面愈合速度和质量。
４ 参考文献： ［１］ ＺｈａｎｇＸＰ，ＬｉＺＦ．Ｇｅｎｅｒａｌｓｉｔｕａｔｉｏｎｉｎｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓｏｎｅｍｏｄｉｎ［Ｊ］．ＣｈｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＢｕｌｌ（中国药理学通报），２００３，１９（８）：８５１－８５４． ［２］ ＤａｖｉｄｓｏｎＪＭ．Ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｆｏｒｗｏｕｎｄｒｅｐａｉｒ［Ｊ］．ＡｒｃｈＤｅｒｍａｔｏｌＲｅｓ，１９９８，１５（８）：１－１１． ［３］ ＭｕｋｈｅｒｉｊｅｅＰＫ，ＶｅｒｐｏｏｒｔｅＲ，ＳｕｒｅｓｈＢ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ ｉｎｖｉｖｏｗｏｕｎｄｈｅａｌｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＨｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐａｔｕｌｕｍ（Ｆａｍｉｌｙ：Ｈｙｐｅｒｉｃａｃｅａｅ）ｌｅａｆｅｘｔｒａｃｔｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｗｏｕｎｄ ｍｏｄｅｌｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０００，２７（９）：３１５－３２１． ［４］ ＰｒｉｙａＫＳ，ＧｎａｎａｍａｎｉＡ，ＲａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎＮ，ＢａｂｕＭ．ＨｅａｌｉｎｇｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆＤａｔｕｒａａｌｂａｏｎｂｕｒｎｗｏｕｎｄｓｉｎａｌｂｉｎｏｒａｔｓ［Ｊ］．ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００２，１２（７）：１９３－１９９． ［５］ ＰｅｌｉｓｓｉｅｒＰ，ＣａｓｏｌｉＶ，ＬｅＢａｉｌＢ，ＭａｒｔｉｎＤ，ＢａｕｄｅｔＪ．Ｉｎｔｅｒｎａｌｕｓｅｏｆｎｂｕｔｙｌ２ｃｙａｎｏａｃｒｙｌａｔｅ（Ｉｎｄｅｒｍｉｌ）ｆｏｒ ｗｏｕｎｄｃｌｏｓｕｒｅ：ａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＰｌａｓｔＲｅｃｏｎｓｔｒＳｕｒｇ，２００１，１０８（６）：１６６１－１６６６． ［６］ ＬｏｗｒｙＯＨ，ＲｏｓｅｂｒｏｕｇｈＮＴ，ＦａｒｒＡＬ，ＲａｎｄａｌｌＲＪ．ＰｒｏｔｅｉｎｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅＦｏｌｉｎｐｈｅｎｏｌｒｅａｇｅｎｔ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９５１，１９３（３）：２６５２７５． ［７］ ＰｏｉｓｓｏｎＥ，ＳｃｉｏｔｅＪＪ，ＫｏｅｐｓｅｌＲ，ＣｏｏｐｅｒＧＭ，ＯｐｐｅｒｍａｎＬＡ，ＭｏｏｎｅｙＭＰ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｅｔａ ｉｓｏｆｏｒｍｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｐｅｒｉｓｕｔｕｒａｌｔｉｓｓｕｅｓｏｆｃｒａｎｉｏｓｙｎｏｓｔｏｔｉｃｒａｂｂｉｔｓ［Ｊ］．ＣｌｅｆｔＰａｌａｔｅＣｒａｎｉｏｆａｃＪ，２００４，４１（４）：３９２－４０２． ［８］ ＹｏｕＷＪ，ＸｉａｏＭＤ，ＹｕａｎＺＸ．ＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｅｔａｍＲＮＡｌｅｖｅｌｓｉｎａｕｔｏｇｅｎｏｕｓｖｅｉｎｇｒａｆｔｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎＭｅｄＪ（Ｅｎｇｌ）（中华医学杂志），２００４，１１７（７）：１０６０－１０６５． ［９］ ＦｕｎａｋｉＴ，ＮａｋａｏＡ，ＥｂｉｈａｒａＮ，ＳｅｔｏｇｕｃｈｉＹ，ＦｕｋｕｃｈｉＹ，ＯｋｕｍｕｒａＫ，ｅｔａｌ．Ｓｍａｄ７ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｏｆＴＧＦｂｅｔａ２ｏｎｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａ-ｔｉｏｎａｎｄａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｗｏｕｎｄｃｌｏｓｕｒｅ ｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｃｏｒｎｅａ，２００３，２２（２）：１５３－１５９． ［１０］ ＡｄｏｌｐｈｅＣ，ＷａｉｎｗｒｉｇｈｔＢ．Ｐａｔｈｗａｙｓｔｏｉｍｐｒｏｖｉｎｇｓｋｉｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＭｏｌＭｅｄ，２００５，７（２０）：１－１４． ［１１］ ＺｈａｎｇＢ，ＤｉｎｇＨ，ＷｅｉＸＢ．Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｔｕｄｙｏｆ ＳｈｕａｎｇｈｕａｎｇｙｕｐｉＦｒｏｓｔ［Ｊ］．ＣｈｉｎＴｒａｄｉｔＰａｔＭｅｄ（中成药），２００２，２４（１１）：８９１－８９２． ［１２］ ＢｒｕｎｎｅｒＧ， ＢｌａｋｙｔｎｙＲ． Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦｂｅｔａａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｗｏｕｎｄｒｅｐａｉｒ：ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｌａｔｅｎｃｙ ａｓａｓｅｎｓｏｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＴｈｒｏｍｂＨａｅｍｏｓｔ，２００４，９２（２）：２５３－２６１． ［１３］ ＳａｉｋａＳ．ＴＧＦｂｅｔａｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｉｎｃｏｒｎｅａｌｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔ［Ｊ］．Ｃｏｒｎｅａ，２００４，２３（８）：２５－３０． 产品链接： 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物 专注植提 精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |
