于加平1 , 王夕宇2 , 马中宇1

( 1 . 吉林农业科技学院生物工程系, 吉林吉林132101 ;2 . 吉尔吉药业有限公司, 吉林吉林132013)

摘要：用乙酸乙酯作溶剂, 采用索氏提取法对黄花忍冬果实中绿原酸进行提取, 高效液相色谱法对绿原酸进行检测和含量的测定。结果表明, 该法对黄花忍冬果实中绿原酸的提取简单、快速; 检测方法可行, 含量测定准确。

关键词：黄花忍冬果实; 绿原酸; 高效液相色谱; 含量测定

忍冬属是忍冬科中较大的属之一, 现知全世界约有200种, 我国约100 种, 广布于各省区, 以西南、华中地区种类最多[ 1] 。其中黄花忍冬( Lonicera chrysantha) 是其中一种, 主要分布于华北、东北、西北。该属植物多为直立或攀援状灌木,许多忍冬可供药用。绿原酸成分一直被认为是忍冬中的主要有效成分, 现代药理研究表明, 其具有抗菌抗病毒作用[ 2] ,还有保肝利胆、止血、抗氧化、抗生育等作用[ 3] 。笔者用乙酸乙酯作溶剂[ 4] , 采用索氏提取法对黄花忍冬果实中绿原酸进行提取, 高效液相色谱法对绿原酸进行检测和含量的测定。结果表明, 在黄花忍冬果实中含有绿原酸, 且含量较高, 为绿原酸的提取提供一种有效方法和原料来源。

1 材料与方法

1 .1 材料日本JASCO BS- 2000 型高效液相色谱仪,CKChro工作站,phenomenex[ 4 .6 ×250 .0 mm,Luna 5μC18( 2) ] 色谱柱。索氏提取器( 上海洪纪仪器设备有限公司) 。乙腈为美国Acetonitrile 、色谱纯, 超纯水, 磷酸为分析纯;绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所, 批号110753-200212 。黄花忍冬果实采自吉林农业科技学院校园内, 经阴干、低温烘干处理为干品。

1 .2 方法

1 .2 .1 黄花忍冬果实中绿原酸的提取。将干燥的黄花忍冬果实用研钵研碎, 称取10 g , 用滤纸包好, 置于索氏提取器中, 往圆底烧瓶中加乙酸乙酯80 ml , 在水浴锅上加热回流3h, 控制温度在75 ℃左右。把回流液倒于蒸馏瓶中进行减压蒸馏至20 ml , 超声溶解, 过滤, 装于棕色具塞管中, 得待测液,放于冰箱中待用。

1 .2.2 绿原酸的检测

1 .2.2.1 色谱条件。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 乙腈- 0 .5% 磷酸溶液( 10∶90) 为流动相; 检测波长327 nm; 流速1 .0 ml/ min ; 柱温25 ℃。理论板数按绿原酸峰计算应不低于3 000 。

1 .2 .2.2 绿原酸对照品溶液的制备。精密称取绿原酸对照品2 .700 mg , 置50 ml 容量瓶中, 加甲醇超声溶解并稀释至刻度, 摇匀,0 .2 μm 滤膜过滤, 取滤液即得浓度为0 .054 mg/ ml 。

2 结果与分析

2 .1 黄花忍冬果实中绿原酸的检测取“1.2.2 .2”的标准品溶液5 μl 和“1.2.1”提取液10μl ( 经0 .2 μm 滤膜过滤) , 按上述色谱条件分别进样分析, 平行进样5 次, 得色谱图,5 次得到相同的色谱图, 说明结果准确, 证实样品中含有绿原酸。

2 .2 黄花忍冬果实中绿原酸的含量测定

2 .2.1 标准曲线的制作。精密吸取对照品溶液( 0 .054mg/ ml ) 1 .0 、5 .0 、10 .0 、15 .0 、20 .0 、25 .0 μl 进样, 记录色谱图, 以绿原酸对照品的浓度为横坐标, 峰面积积分值为纵坐标, 进行线性回归分析, 得回归方程Y= 323 624 X - 24 308 , 相关系数r = 0 .999 6( n= 5) 。绿原酸在0 .000 54 ～0 .013 50 μg 范围内呈现良好线性关系。

图1 绿原酸对照品与黄花忍冬果实样品HPLC 色谱图

Fig .1 HPLC Chromatograms of reference substance and sample

2 .2 .2 稳定性实验。取对照品溶液分别于配制后0 、1 、2 、4 、8 、12 h , 取滤液10μl 注入色谱仪, 记录色谱图, 考察溶液放置后峰面积的变化情况, RSD 为0 .27% , 表明供试品溶液在12h 内稳定。

2 .2.3 精密度实验。取对照品溶液连续重复进样5 次, 记录色谱图, 考察峰面积的变化情况, RSD 为0 .19% , 表明该含量测定方法精密度良好。

2 .2.4 回收率实验。精密称定已测定含量的黄花忍冬果实5 份, 每份约10 .0 g , 按“1 .2 .1”方法提取后精密加入绿原酸对照品0 .890 mg , 经0 .2 μm 滤膜过滤, 进样, 测定峰面积。计算平均回收率为99 .37% , RSD 为1 .47 % , 结果见表1 。

2 .3 样品含量的测定取“1.2.1”制备的黄花忍冬果实提取液20 μl ( 经0 .2 μm 滤膜过滤) , 平行进样3 次, 得色谱图, 按外标法计算样品中绿原酸含量, 测得平均含量为0 .28% 。

3 结论

(1) 采用索氏提取法对黄花忍冬果实中绿原酸进行提取, 经高效液相色谱法检测, 证实黄花忍冬果实中含有绿原酸, 经外标法测定其含量为0 .28 % 。

( 2) 目前黄花忍冬多数为城市的绿化树种, 其果实是一种尚未被开发利用且很有价值的药用资源, 我国黄花忍冬果实资源极为丰富, 需要对其进行开发研究, 使之得到合理应用。通过该实验证实, 黄花忍冬果实中含有绿原酸且其含量较高, 这为黄花忍冬果实的综合开发利用奠定了基础。

参考文献

[1] 李会军, 李萍. 忍冬花蕾的化学成分研究[J] . 林产化学与工业,2005,25(3) :29- 32.

[2] 中国药典委员会. 中国药典: 一部[ M] . 北京: 化学工业出版社,2000 :177 .

[3] 邢俊波, 李萍. 忍冬属化学成分研究概况及展望[J] . 中药材,1999 ,22(7) :366 - 370.

[4] 邓素兰, 余继宏, 邓芳琴. 金银花中绿原酸提取工艺的对比[J] . 吉首大学学报: 自然科学版,2007,28(2) :109- 112 .

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