蒋王林 1，2*，高玉白1，田京伟1，傅风华1

（1 山东省天然药物工程技术研究中心烟台大学药学院 山东 烟台 264003；

2 中国药科大学，江苏 南京 210009）

摘要 目的研究大黄素葡甲胺犬静脉注射体内药动学特征。方法 beagle 犬6 只，4mg.kg-1

静脉注射，取血，HPLC 测定血浆药物浓度。结果 大黄素葡甲胺在犬血中符合二房室模型处置特征，T1/2α：5.3±2.9min；T1/2β：37.4±6.7min；k21：0.035±0.009min-1；k10：0.085±0.030min-1；k12：0.069±0.062min-1；VC：347.3±84.4mL.kg-1；AUC：0.147±0.024min.mg.mL-1；CL：27.8±4.5mg.(kg.min)-1。结论 大黄素葡甲胺静脉注射在犬体内半衰期短，具有消除快，无药物蓄积的特点。

关键词 大黄素葡甲胺药动学 HPLC 二房室模型

大黄素具有抗炎作用，能显著抑制乙酸所致的小鼠毛细血管通透性增加[1]；促进豚鼠离体肠管收缩[2]；呈剂量依赖性加强豚鼠结肠带平滑肌细胞电和收缩活动，机制与抑制细胞膜KATP 等钾通道的活性相关[3]；亦明显抑制大鼠肝纤维化形成[4]。我们进行药理研究时发现大黄素 10mg.kg-1 静脉注射给药对大鼠实验性肠粘连有较好的治疗作用（另文发表），为此我们对大黄素静脉注射在犬体内的药动学进行了研究，为临床用药提供理论指导。

1 材料

1.1 药物与试剂：大黄素葡甲胺冻干粉针（由山东省天然药物工程技术研究中心制剂室提供，批号：规格：50mg）；肝素钠注射液（徐州万邦生化制药有限公司，批号：020419）；大黄素葡甲胺对照品（自制，纯度达99.5%以上）；色谱纯甲醇，高氯酸、乙酸乙酯为分析纯，重蒸水（自制）

1.2 动物：种属：beagle 犬，性别和数量：6 只，♀♂各半。动物年龄和体重：4 个月龄，6.5～8.0kg，动物来源：中国科学院上海实验动物中心，动物合格证号：中科沪动管第99-0011 号

1.3 仪器：HPLC 色谱仪（泵：TSP P2000；自动进样器：TSP AS3000；检测器：UV3000；工作站 OS/2 cHemstation；恒温箱）；色谱柱：discovery C18 柱（25cm×4.6mm，粒径：5μm）；低压溶剂过滤器；冷冻离心机，，涡旋振摇器，电子秤

2 方法

2.1 色谱条件[5]：流动相：甲醇：0.1%磷酸水溶液（ 85：15）；流速：1.0mL.min-1；检测波长：254nm；柱温:40℃ ；采用标准曲线法定量测定血浆大黄素葡甲胺浓度。

2.2 样品处理方法：犬股静脉抽取2.0mL 血，肝素抗凝，3000r*min-1 离心10min，取血浆0.40mL 于1.5mL eppendorf 管中，加入6％高氯酸0.20mL，闭塞，于振摇器上振摇1 分钟，加入乙酸乙酯0.40mL，闭塞，于振摇器上振摇1 分钟，10000r*min-1 离心10min，精密吸取乙酸乙酯层0.20mL 于1.5mL eppendorf 管中，于40℃ N2 吹干，精密吸取色谱醇甲醇0.60mL，振摇溶解转移至1.5mL 的进样甁中，自动进样，上HPLC，进样体积为20μL，用标准曲线法进行色谱分析。

2.3 试验方案：取大黄素葡甲胺冻干粉针，NS 溶解，配制成4.0 mg/ml 的药液，随即取beagle 犬6 只，耳缘静脉给药，剂量：4.0 mg.kg-1（按对大鼠实验性肠粘连具有治疗作用的有效剂量 10mg.kg-1 制定的），给药体积：1.0 ml/kg，10s 给完，于给药2、10、20、30、40、50、60、75、90、120 分钟后犬大腿静脉抽血2 mL，肝素抗凝，随即离心，3000 r*min-1 10min，取上清液0.40 mL，其余操作同2.2项下。

2.4 标准曲线：取空白犬血浆，使血浆中大黄素脯甲胺标准品的浓度为0.13、0.26、0.65、1.30、3.25、6.5、16.25 μg.mL-1，分别取血浆样品0.40 mL，按2.2 项下操作后进行HPLC 测定，进样体积为20 μL，实际大黄素脯甲胺标准品的进样浓度为0.043、0.086、0.215、0.43、1.075、2.15、5.375 μg.mL-1,得到大黄素葡甲胺的面积（ Abb）。以Abb 值作为Y 轴，以血浆大黄素葡甲胺浓度（ Cbb）为x 轴，得标准曲线为：y=87708*x+893（r=0.9996），结果表明血浆大黄素葡甲胺浓度0.043μg.mL-1~5.375μg.mL-1 线性关系良好。

2.5 回收率：取含大黄素脯甲胺对照品浓度分别为1.70μg.mL-1、0.85μg.mL-1、0.425μg.mL-1、0.213μg.mL-1 的犬血浆0.40 mL，每一浓度分别取6 个样品于1.5mL eppendorf 管中，加入6％高氯酸0.20mL，闭塞，于振摇器上振摇1 分钟，加入乙酸乙酯0.40mL，闭塞，于振摇器上振摇1 分钟，10000r*min-1 离心10min，精密吸取乙酸乙酯层0.20mL 于1.5mL eppendorf 管中，于40℃ N2 吹干，精密吸取色谱醇甲醇0.60mL，振摇溶解转移至1.5mL 的进样甁中，结果四种浓度梯度的大黄素脯甲胺回收率见表1。

2.6 日内与日间精密度：含大黄素脯甲胺低、中、高浓度血浆0.086、1.075、5.375μg.mL-1，按2.2 项下操作后进行HPLC 测定，在48h 内测定6 组，结果48小时内RSD 值为3.51%，2.45%，1.89% 。

2.7 稳定性：按标准曲线配制方法配制含大黄素脯甲胺浓度为0.26μg.mL-1、3.25μg.mL-1、16.25 μg.mL-1血浆样品，每个浓度5份，每隔5天按2.2项下操作后进行HPLC 测定1份，考察样品在-20℃冷冻放置条件下的稳定性 。结果3种浓度的大黄素脯甲胺血浆样品在2 0天的稳定性较好，RSD 值为4.58%，4.29%，4.35.%。

2.8 检测限：以信噪比（S/N）为3 时的大黄素脯甲胺对照品浓度为本HPLC 方法的检测限，取空白犬血浆，使血浆中大黄素脯甲胺标准品的浓度为0.02μg.mL-1、0.040μg.mL-1、0.080μg.mL-1，分别取 0.40 mL 血浆，按2.2 项下操作。结果本法的检测限达0.013μg.mL-1。

2.9 专一性：由色谱图1 可以看出，犬血浆内源性物质与大黄素脯甲胺能很好地分离，均已达到基线分离效果，含大黄素脯甲胺血浆，处理后加入大黄素脯甲胺对照品溶液，峰重叠，表明专一性良好，成为标准曲线法定量分析犬血浆大黄素脯甲胺浓度的前提。

2.10 数据处理：应用中国药理学会委员会编制的3P97 药动学计算软件进行处理

大黄素脯甲胺血浆药物浓度。

3 结果

3.1 各样品色谱图：见图1。大黄素脯甲胺对照品色谱图显示大黄素脯甲胺对照品的色谱峰均一，定量99.5%，保留时间为10.101min，从犬的空白血浆色谱图可以看出血浆杂质出峰比较靠前，在大黄素脯甲胺保留时间前后，无明显杂质峰，犬含药保留时间为10.228min，犬含药血浆处理样品加入黄素脯甲胺对照品保留时间为10.232min。

3.2 大黄素葡甲胺血药浓度-时间曲线

Fig.1 HPLC chromatograms of meglumine emodin reference substance (A) ,blank

plasma(B), plasma with drug(C), and plasma with drug added reference substance(D)

6 只犬静脉推注大黄素脯甲胺后，测得大黄素脯甲胺平均血药浓度-时间曲线见图2。

图2 大黄素葡甲胺静脉推注犬血药浓度-时间曲线

Fig.2 The curve of plasma drug concentration and time afte iv meglumine emodin

3.3 大黄素葡甲胺药物动力学特性

大黄素脯甲胺静脉推注在犬体内的药动学过程符合二房室模型，其主要药动学参数见表2。

表 2 大黄素葡甲胺静脉注射犬体内药动学参数

Table 2.The pharmacokinetic parameters in dogs after venous injection meglumine emodin

parameter unit

结果表明大黄素脯甲胺在犬体内半衰期短，大黄素脯甲胺静脉推注具有消除快，无药物蓄积的特点。

4 讨论

孙阳等[6]研究了大黄素及其代谢产物在小鼠体内排泄的定量分析，结果小鼠单剂量口服大黄素91 mg/kg，在0-48h 内，使用750 型微量紫外-可见分光光度计测定尿及粪中总蒽醌排泄量为剂量的53%，其中在0-24 小时尿排泄量为剂量的30%。王新宏[7]等对大鼠灌胃给予大黄，结果测定了血浆中大黄五种蒽醌苷元芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。庞志功[8]等研究了家兔灌胃给予大黄后，测定了家兔体内大黄素、大黄酚，血样前处理使用薄层板分离大黄素、大黄酚进行荧光测定,以上研究均未对大黄素进行药动学研究。J.W.Liang 等[9]对大黄素静脉给药在家兔（n＝6）体内的药动学进行了研究，结果静脉给药10mg.kg-1 后在家兔血中符合二房室模型处置特征，AUC：0.518±0.355min.mg·mL-1，CL：72.3±49.2mg·(kg.min) -1，T1/2α：6.85±1.96 min；T1/2β：227±246 min，血浆蛋白结合率高达99.6%。

本文首次对大黄素葡甲胺盐在犬体内药动学进行了研究，结果犬静脉推注4mg/kg 后在犬血中符合二房室模型处置特征，与J.W.Liang 等的研究结果基本相同。

该方法色谱行为、大黄素脯甲胺血样日内与日间差试验、稳定性试验、精密度试验、大黄素脯甲胺血样加样回收试验均符合要求，该方法分析时间短，大黄素出峰时间短，无干扰峰的特点，适用于血样中的大黄素的测定。

References

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[2] JIN Zhuhua,Ma Delu,Lin Xiuzhen,etal.Study on Effect of meglumine meglumine emodin on the Isolated Intestinal Smooth Muscle of Guinea-Pigs. C JI T WM[J](in Chinese),1994,14（7）：429-431.

[3] LI Junying,Yang Wenxin,Hu Wenweit,etal. Effecth of Meglumine meglumine emodin on the Activity of K Channel in Guinea Pig Taenia Coli Smooth Muscle Cells. Acta Pharmaceutica Sillica[J](in Chinese),1998，33（5）：321—325.

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[6] SUN Yang,Li qiang,Chen Qionghua.Excretion of emodin and its metabolites in mice.Journal of Nanjing College of Pharmacy[J](in Chinese),1986,17(2):132-134.

[7] WANG Xinhong,Fan Guangping,An Rui,etal. Determination of the dissociative Rhubarb by HPLC in rats plasma.ZhongChengYao[J](in Chinese),1999，19（1）：37-39.

[8] PANG Zhigong,Wang Baoqi,Li Shengyou.Studies the pharmkinetics of Emodin and Chrysophanol in rabbits.Journal of Xi,an Medical University[J](in Chinese),1993，14（4）：346-348.

[9] J W Liang,S L Hsiu,P P Wu,et al.Emodin Pharmacokinetics in Rabbits.Planta Med[J],1995,61:406-408.Pharmacokinetic of meglumine emodin in dogs after venous injection

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