【摘要】  目的 建立以高效液相色谱法测定热毒平颗粒中绿原酸含量的方法。方法 色谱柱为YMC公司ODS-A柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90),流速为1.0 mL/min,检测波长为327 nm。结果 绿原酸的检测浓度在0.084 8～0.848 μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r＝0.999 9)；平均回收率为102.60%,RSD＝1.69%(n＝6)。结论 本法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。

【关键词】  热毒平颗粒；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定

Determination of Chlorogenic Acid in Reduping Keli by HPLC

LI Ping, GAO Song, CHEN Yu-jie, et al

1.Hebei University of Technology, Tianjin 300130, China；2.Tianjin Longshunrong Pharmaceutical Factory of Zhongxin Pharmaceuticals, Tianjin 300457, China

Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of Chlorogenic acid in Reduping Keli. Methods The determination was performed by HPLC using an YMC ODS-A column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), with mobile phase consisted of acetonitrile-0.2%H3PO4 solution (10∶90) at a flow rate of 1.0 mL/min and a detection wavelength of 327 nm. Results The calibration curve for Chlorogenic acid was linear in the concentration range of 0.008 5～0.084 8 mg/mL (r＝0.999 9). The average recovery was 102.60 % (RSD＝1.69%, n＝6). Conclusion The method is simple, rapid and applicable for the quality control of Reduping Keli.

Key words：Reduping Keli；Chlorogenic acid；HPLC；content determination

热毒平颗粒由金银花、生石膏、玄参、地黄等中药制成,具有清热解毒之功效,用于治疗流感、上呼吸道感染及各种发热等症[1]。绿原酸为该制剂主药金银花的主要有效成分,具有明显的抗炎、杀菌、抗病毒的作用[2]。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定该制剂中绿原酸的含量,方法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。

1  仪器与试药

SP8800高效液相色谱仪(美国光谱物理公司)；分析之星色谱工作站；紫外FOCUS检测器。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110753-200413)；热毒平颗粒(天津中新药业隆顺榕制药厂,批号0602001、0602002、0602003)。乙腈为色谱纯,磷酸为分析纯,水为纯净水。

2  方法与结果

2.1  色谱条件及系统适应性试验

色谱柱：YMC公司ODS-A柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：327 nm；进样量：10 μL。理论板数按绿原酸峰计应不低于3 000,分离度＞1.5。色谱图见图1。

2.2  溶液的制备

2.2.1  对照品溶液的制备

精密称取绿原酸对照品4.24 mg,置于50 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成浓度为0.084 8 mg/mL的对照品储备溶液,10 ℃以下保存。再精密量取4 mL置10 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,制成含绿原酸0.033 9 mg/mL的对照品溶液。

2.2.2  供试品溶液的制备

取本品7 g,精密称定,研细,混匀,取约0.5 g,精密称定,放入具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25 mL,称定重量,密塞,超声处理(功率250 W,频率33 kHz) 30 min,放冷,再称定重量,用50 %甲醇补足减失的重量,摇匀,以0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3  阴性对照溶液的制备

按处方取除金银花的各味药材,按制法制得样品,再按“2.2.2”项下方法,制得阴性对照溶液。

2.3  标准曲线的建立

精密吸取绿原酸浓度为0.084 8 mg/mL的对照品储备溶液1、2、4、8、10 mL,置10 mL量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程为：Y＝55 799 416X－28 478.3(r＝0.999 9)。结果表明,绿原酸检测浓度在0.084 8～0.848 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.4  精密度试验

精密吸取对照品溶液10 μL,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积。结果RSD＝0.52%,表明本方法精密度良好。

2.5  稳定性试验

取同一批号(0602001)样品,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件分别在0、1、2、4、6、8 h进样,测定绿原酸峰面积。结果RSD＝0.64%,表明供试品溶液在8 h之内稳定。

2.6  重复性试验

取同一批号(0602001)样品精密称取0.5 g,共6份,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定每份样品中绿原酸含量。结果绿原酸的平均含量为1.190 mg/g, RSD＝0.88%,表明方法重复性良好。

2.7  加样回收率试验

精密称取绿原酸对照品适量,配制成0.012 4 mg/mL的对照品储备溶液,取同一批号(0602001)样品,研细,混匀,取0.25 g,精密称定,共6份,精密加入绿原酸对照品储备溶液各25 mL,按照“2.2.2”项下方法制得供回收率用供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率。结果平均回收率为102.60%, RSD＝1.69%。结果见表1。表1  加样回收率试验结果(略)

2.8  样品含量测定

取本品3批,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,结果见表2。表2  样品中绿原酸含量测定结果(略)

3  讨论

取绿原酸对照品的甲醇溶液,在190～650 nm波长范围进行扫描,在327 nm波长处有较大吸收,与2005年版《中华人民共和国药典》中金银花的测定波长一致,故测定波长选定为327 nm。

以多种比例乙腈-0.2%磷酸溶液(15∶85、13∶87、10∶90)试验选择流动相[3-5],当比例为10∶90时,绿原酸峰分离度大于1.5,保留时间为6.967 min,主峰与杂质峰分离良好,同时无干扰峰,基线平直。

【参考文献】
[1] WS3-B-3965-98,中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第22册)[S].

[2] 毕跃峰,田 野,裴姗姗,等.金银花中裂环环烯醚萜苷类化学成分研究[J].中草药,2008,39(1)：18－21.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.153.

[4] 刘 冰,王蓉华,徐永波.HPLC法同时测定银黄胶囊中绿原酸、黄芩苷含量[J].中国药事,2006,20(5)：303.

[5] 孟品佳,孙毓庆.高效液相色谱法分离金银花成份及测定绿原酸含量[J].药物分析杂志,1990,10(1)：58.

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