本试验旨在研究饲粮中添加不同水平的金银花提取物对蛋鸡生产性能、蛋品质、脂 质代谢及蛋黄胆固醇含量的影响。试验选用 34 周龄体况健康、产蛋率接近的京粉 2 号蛋鸡 600 只，随机分成 4 组，每组 5 个重复，每个重复 30 只鸡。对照组饲喂基础饲粮，试验组 分别饲喂在基础饲粮中添加 100、200 和 300 mg/kg 金银花提取物的试验饲粮。试验期 35 d。 结果表明：1）与对照组相比，300 mg/kg 组平均蛋重和平均日采食量显著增加（P<0.05）。2） 与对照组相比，各试验组的哈氏单位均显著提高（P<0.05）。3）与对照组相比，各试验组血 清总胆固醇和甘油三酯含量均显著降低（P<0.05），200 和 300 mg/kg 组血清高密度脂蛋白胆 固醇含量显著增加（P<0.05），200 和 300 mg/kg 组蛋黄胆固醇含量显著降低（P<0.05）。由 此可见，饲粮中添加金银花提取物可以提高平均蛋重、平均日采食量和鸡蛋哈氏单位，改善 蛋鸡脂质代谢，降低蛋黄胆固醇含量，其中以 300 mg/kg 组效果最为明显。 关键词：金银花提取物；蛋鸡；生产性能；蛋品质；蛋黄胆固醇 中图分类号：S831 金银花是忍冬科忍冬属多种植物的干燥花蕾，是我国的传统中药之一[1]。金银花主要化 学成分为酚酸、黄酮、挥发类油和三萜皂苷类等[2-3]。金银花提取物主要的活性成分是绿原 酸（chlorogenic acid,CGA）。研究表明，CGA 具有抗氧化、抗菌、抗病毒等功能，可以增强 机体免疫力[4]；最新研究表明，CGA 在调控机体的糖脂代谢方面有显著作用[5]。目前关于金 银花提取物对蛋鸡蛋黄胆固醇含量和脂质代谢的影响鲜有报道。因此，本研究以 34 周龄京 粉 2 号蛋鸡为试验动物，在饲粮中添加不同水平的金银花提取物，分别测定蛋鸡的生产性能、 蛋品质、脂质代谢和蛋黄胆固醇含量，并探讨通过添加金银花提取物来降低鸡蛋胆固醇含量 

*为金银花提取物在蛋鸡生产中的应用提供依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 金银花提取物有效成分 CGA 含量为 25%。 1.2 试验设计及饲养管理 试验选用同一鸡舍内产蛋率相近、体重相近、健康状态良好的 34 周龄京粉 2 号蛋鸡 600 只，随机分成 4 组，每组 5 个重复，每个重复 30 只鸡。对照组饲喂基础饲粮（不含金银花 提取物），试验组分别饲喂在基础饲粮中添加 100、200 和 300 mg/kg 金银花提取物（有效成 分 CGA 含量分别为 25、50 和 75 mg/kg）的试验饲粮。基础饲粮组成及营养水平见表 1。 表 1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础） Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet （air-dry basis） % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 玉米 Corn 63.00 豆粕 Soybean meal 25.68 豆油 Soybean oil 0.70 石粉 Limestone 8.16 磷酸氢钙 CaHPO4 1.67 DL-蛋氨酸 DL-Met 0.16 食盐 NaCl 0.30 预混料 Premix1） 0.33 合计 Total 100.00 营养水平 Nutrient levels2） chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 代谢能 ME/（MJ/kg） 11.35 粗蛋白质 CP 16.99 蛋氨酸 Met 0.42 赖氨酸 Lys 0.84 蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys 0.72 钙 Ca 3.60 有效磷 AP 0.43 1)每千克预混料包含 Per kg of premix contained the following: VA 4 000 000 IU，VD3 600 000 IU，VE 20 g，VK3 500 mg，VB1 50 mg，VB2 3 g，烟酸 nicotinic acid 1 500 mg，泛酸 pantothenic acid 70 mg，叶酸 folic acid 500 mg，氯化胆碱 choline chloride 20 g，Fe 60 g，Cu 10 g，Mn 50 g，Zn 70 g，Se 25 mg。 2)营养水平为计算值。Nutrient levels were calculated values. 试验期间，每天 06:30 和 14:30 各喂饲料 1 次。采用 3 层阶梯式笼养方式，自由采食、 饮水。每天光照 16 h，并清粪 1 次。试验分为预试期 7 d 和正试期 28 d，共 35 d。 1.3 测定指标及方法 1.3.1 生产性能 以重复为单位每天记录蛋重、产蛋数、投料量、剩余料量、鸡只存栏数、破软蛋数， 并计算平均蛋重、产蛋率、平均日采食量、破软蛋率、料蛋比。 1.3.2 蛋品质 试验的最后 1 天，分别从每组中随机采取 20 个鸡蛋（每重复 4 个）用于测定鸡蛋物理 品质指标，测定指标包括蛋形指数、蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋壳厚度、哈夫单位。测定仪器 包括蛋质检测仪（沈阳富士平工业有限公司）、蛋壳强度测定仪（沈阳富士平工业有限公司）、 罗氏比色扇（美国罗氏公司）。 chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 1.3.3 蛋黄胆固醇含量 从每组中随机采取 10 个鸡蛋（每重复 2 个）测定蛋黄胆固醇含量。煮熟鸡蛋，研磨均 匀，称取蛋黄 1 g，用甲醇氯-仿溶液（1:3）研磨至无明显颗粒，混合 8 min，过滤至 10 mL 容量瓶，并补充甲醇-氯仿溶液定容，待用。分别取 0.02 mL 蛋黄滤液、胆固醇标准液、甲 醇-氯仿溶液加入样品管、标准管和空白管。在上述 3 支试管中加入邻苯二甲醛试剂 3 mL， 浓硫酸 2 mL，混匀，冷却。用 T-6 紫外可见分光光度计（北京普析）以空白管调零，在 560 nm 处比色，计算蛋黄胆固醇含量[6] 。 1.3.4 脂质代谢 试验结束时，每个重复中随机选取 1 只鸡，翅静脉采血，以 3 000 r/min 离心 10 min， 分离血清，于-20 ℃保存。血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C） 和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测 定。 1.4 统计分析 试验数据差异采用 SPSS 20.0 软件进行单因素方差分析（one-way ANOVA）进行，采 用 Duncan 氏法进行多重比较，结果以平均值±标准差表示。 2 结 果 2.1 金银花提取物对蛋鸡生产性能的影响 由表 2 可知，各试验组的产蛋率、料蛋比和破软蛋率与对照组相比无显著差异（P>0.05）。 平均蛋重随着金银花提取物水平的增加呈先降低后升高的趋势，100 和 200 mg/kg 组的平均 蛋重与对照组相比无显著差异（P>0.05），300 mg/kg 组的平均蛋重与对照组相比显著增加 （P<0.05）。300 mg/kg 组的平均日采食量与对照组相比显著增加（P<0.05）。 表 2 金银花提取物对蛋鸡生产性能的影响 Table 2 Effects of honeysuckle extract on performance of laying hens chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 项目 金银花提取物水平 Honeysuckle extract level/（mg/kg） Items 0 100 200 300 产蛋率 LR/% 92.81±1.83 91.62±1.90 92.15±2.15 94.07±1.76 平均蛋重 AEW/g 58.32±0.66b 58.17±0.44b 58.39±0.74b 59.33±0.55a 平均日采食量 ADFI/g 111.62±2.28b 111.22±2.37b 112.76±1.81b 115.26±0.27a 料蛋比 F/E 1.94±0.06 1.98±0.08 1.97±0.05 1.95±0.04 破软蛋率 Broken egg rate/% 0.40±0.17 0.27±0.18 0.24±0.23 0.47±0.25 同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P>0.05），肩标不同字母表示差异显 著（P<0.05）。下表同。 In the same row, values with the same or no letter superscripts mean no significant difference （P>0.05）, while with the different letter superscripts mean significant difference （P<0.05）. The same as below. 2.2 金银花提取物对蛋鸡蛋品质的影响 由表 3 可知，与对照组相比，各试验组的蛋形指数、蛋黄颜色、蛋壳厚度、蛋壳强度 均无显著差异（P>0.05）。与对照组相比，各试验组的哈氏单位均显著提高（P<0.05），分别 提高了 8.2%、6.2%和 9.2%。 表 3 金银花提取物对蛋鸡蛋品质的影响 Table 3 Effects of honeysuckle extract on egg quality of laying hens 项目 金银花提取物水平 Honeysuckle extract level/（mg/kg） Items 0 100 200 300 蛋形指数 ESI 1.36±0.03 1.35±0.02 1.37±0.04 1.36±0.02 蛋壳强度 ES/kgf 3.35±0.75ab 3.40±0.50ab 3.15±059b 3.60±0.68a 蛋黄颜色 YC 13.45±1.15 13.25±0.79 13.20±0.95 12.90±0.92 chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 蛋壳厚度 ET/mm 0.38±0.03 0.39±0.03 0.38±0.04 0.38±0.03 哈氏单位 HU 85.72±4.42b 93.42±6.20a 91.10±4.62a 93.60±5.28a 2.3 金银花提取物对蛋鸡脂质代谢和蛋黄胆固醇含量的影响 由表 4 可知，与对照组相比，各试验组的血清 TG 含量显著降低（P<0.05）；各试验组 的血清 TC 含量显著降低（P<0.05），300 mg/kg 组下降最明显为 27.56%。血清 HDL-C 含量 随金银花提取物水平升高而升高，200、300 mg/kg 组的血清 HDL-C 含量显著高于对照组 （P<0.05）。与对照组相比，各试验组血清 LDL-C 含量无显著差异（P>0.05）。与对照组相 比，200 和 300 mg/kg 组的蛋黄胆固醇含量显著降低（P<0.05），分别下降了 8.17%和 18.64%。 表 4 金银花提取物对蛋鸡脂质代谢和蛋黄胆固醇含量的影响 Table 4 Effects of honeysuckle extract on lipid metabolism and yolk cholesterol content of laying hens （mmol/L） 项目 金银花提取物水平 Honeysuckle extract level/（mg/kg） Items 0 100 200 300 血清 Serum/（mmol/L） 甘油三酯 TG 18.78±1.12a 15.97±0.64b 15.55±0.59b 16.20±1.47b 总胆固醇 TC 3.58±0.66a 3.07±0.30b 3.01±0.22b 2.59±0.20b 高密度脂蛋白胆固醇 HDL-C 1.01±0.06b 1.14±0.14ab 1.25±0.10a 1.26±0.13a 低密度脂蛋白胆固醇 LDL-C 1.23±0.13 1.14±0.14 1.13±0.12 1.15±0.15 蛋黄 Egg yolk/（mg/g） 胆固醇 Cholesterol 13.95±0.51a 14.00±0.81a 12.81±1.06b 11.43±1.02c 3 讨 论 3.1 金银花提取物对蛋鸡生产性能的影响 本试验结果表明，饲粮中添加 300 mg/kg 的金银花提取物可以显著提高蛋鸡平均日采 chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 食量和平均蛋重。金银花提取物中的主要活性成分是 CGA，CGA 具有抗氧化性、抗菌、抗 毒、提高免疫力等多种功能[7]。张瑞仙[8]研究显示，在罗曼粉蛋鸡饲粮中分别添加 0.5%、1.0%、 1.5%和 2.0%金银花，蛋鸡的平均日采食量均分别提高了 5.46%、8.20%、9.53%和 9.63%， 1.0%、1.5%和 2.0%的添加量均显著提高了产蛋率。黄涛等[9]在爱拔益加（AA）肉鸡饲粮中 添加 0（对照）、0.05%、0.10%、0.15%和 0.20%的杜仲叶 CGA，结果发现，0.15%试验组与 对照组相比可以显著提高 7~14 日龄和 28~35 日龄肉鸡的平均日增重，0.05%和 0.15%试验组 可分别降低 28~35 日龄肉鸡料重比 21.15%和 19.34%。上述研究表明，CGA 在改善动物生产 性能方面具有积极作用。CGA 改善动物生产性能可能是由于其具有较强的抗氧化能力，对 脂质过氧化抑制有积极作用[10]。关炳烽等[11]试验表明，金银花提取物抗氧化能力与 CGA 含 量相关，且其清除羟基自由基的能力优于维生素 C。Zang 等[12]研究发现，CGA 清除羟基的 清除速率常数为 7.73×109 ，认为 CGA 的抗氧化性可能与直接清除羟基自由基有关。李文娜 等[13] 研究发现，CGA 对超氧阴离子、羟基自由基、烷过氧自由基及 1,1-二苯基-2-苦肼基等 自由基有较强的清除作用，对烷过氧自由基、超氧阴离子的清除能力超过了维生素 C。此外， CGA 具有抗菌、抗病毒的能力，有助于提高家禽免疫力，从而改善生产性能。研究表明， CGA 可以增强流感病毒抗原引发的 T 细胞增殖[14]，并且在大鼠的研究中发现 CGA 可以显 著提高其体内免疫球蛋白 E（IgE）、免疫球蛋白 G（IgG）和白细胞介素-4（IL-4）含量[15]。 马力等[16] 研究表明，CGA 可显著提高大鼠肠道固有层淋巴细胞中 γ 肿瘤坏死因子和α干扰 素含量。 3.2 金银花提取物对蛋鸡蛋品质的影响 本试验结果表明，试验组蛋形指数、蛋黄颜色、蛋壳厚度、蛋壳强度与对照组相比均无 显著差异。各试验组均显著提高了鸡蛋哈氏单位，说明金银花提取物能够提高蛋白高度，一 定程度上有助于增强蛋白分泌。张瑞仙[8]研究发现，在饲粮中添加 0.5%和 1.5%的金银花粉 可适当提高鸡蛋哈氏单位，但差异并不显著。鸡蛋蛋白的分泌主要是在输卵管的膨大部分， chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 金银花提取物可能在此对分泌产生影响，由于其活性物质 CGA 具有很好的抗氧化能力，有 助于维持细胞膜的正常生理功能，这对分泌部位细胞膜可能具有积极作用，但其具体机制尚 不完全清楚。邵洪等[17]认为，自由基会对氨基酸、多肽、蛋白质等进行修饰，促进蛋白质 的降解，而金银花提取物中含有的 CGA 对自由基有良好的清除作用。 3.3 金银花提取物对蛋鸡脂质代谢和蛋黄胆固醇含量的影响 蛋鸡体内的胆固醇来源主要有 2 个途径，第 1 个途径是外源性的胆固醇（饲粮中的胆固 醇），由于蛋鸡饲粮中通常不含胆固醇，所以这一途径可忽略不计；第 2 个途径是蛋鸡自身 合成，合成的主要部位是肝脏，在肝脏中合成蛋黄胆固醇的前体物质是极低密度脂蛋白和卵 黄蛋白原，合成的蛋黄胆固醇通过血液循环进入卵巢沉积于蛋黄中[18]。蛋鸡体内的胆固醇 主要通过 3 种方式排出，其一是通过鸡蛋排出，这是最主要的方式，大概占胆固醇的 2/3； 其二是由肝脏和肠道产生中性固醇以粪便形式排出体外；其三是在肝脏中氧化的胆固醇形成 胆汁酸通过粪便排出[19]。本试验研究发现，200 和 300 mg/kg 组蛋黄胆固醇含量与对照组相 比分别下降了 8.17%和 18.64%。金银花提取物中主要活性物质 CGA 影响蛋鸡脂肪代谢的原 因可能有：1）通过影响胆固醇合成和分解的相关酶活性及相关基因表达来影响胆固醇水平。 李文娜等[20]研究发现，杜仲叶 CGA 提取物抑制猪肝脏 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶 A （HMG-CoA）还原酶的效价强于辛伐他丁。HMG-CoA 还原酶是胆固醇合成过程中的限速 酶。Ong 等[21]给口服葡萄糖耐量试验后的 db/db 小鼠饲喂含 250 mg/kg CGA 的饲粮，发现 CGA 可以通过激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)来改善葡萄糖和脂质代谢，从而影响 AMPK-羟甲基戊二酸单酰辅酶 A 还原酶(HMGR)通路。AMPK 作用于 HMGR 肽链中 Ser-871 位点[22]。研究不同浓度 5-氨基-4-咪唑羧基酰胺核苷（AICAR）对肝细胞 HMGR 活性影响时 发现，随着 AICAR 浓度增加，AMPK 呈剂量依赖性活化的同时，HMGR 呈剂量依赖性失活 [23-24]。所以 CGA 可能通过激活 AMPK，导致 HMGR 磷酸化失活，使胆固醇合成受到显著 抑制。胆固醇 7α-羟化酶（CYP7A1）是肝脏合成并促使胆固醇转化为胆汁酸的限速酶[25] 。 chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 Wan 等[26] 通过对大鼠饲喂正常饲粮、高胆固醇饲粮以及在高胆固醇饲粮的基础上添加 CGA （1 和 10 mg/kg）的饲粮的研究，发现与正常饲粮组相比，饲粮添加 CGA 后，CYP7A1 表 达有所增加，促使胆固醇转化为胆汁酸。2）通过调节胆固醇调节元件结合蛋白（SREBPs） 影响胆固醇合成。Murase 等[27]发现，在 Hepal-6 细胞中添加 5 μmol/L CGA 可以下调乙酰辅 酶 A 羧化酶、脂肪酸合成酶和 SREBP-1c 等 mRNA 表达。3）通过增强过氧化物酶体增殖物 激活受体（PPARs）来提高内源胆固醇的逆向转运，增强胆汁酸排泄。Li 等[28]给雄性黄金仓 鼠饲喂高脂饲粮（含脂肪 15%），之后对试验组每天按每千克体重 80 mg 的剂量在腹腔注射 含 CGA 的溶剂，8 周后 CGA 显著提高了仓鼠肝脏 PPAR-α mRNA 和蛋白质的表达水平。 Fruchart 等[29]认为，PPARs 的活化作用于与高密度脂蛋白（HDL）相关的 5 种基因，包括载 脂蛋白 A（apo-A）、载脂蛋白 B（apo-B）、脂蛋白酯酶（LPL）、B 族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)和 ATP 结合盒转运蛋白 A1（ABCAl），从而促进 HDL 形成，提高血清中 HDL 含量，促 进胆固醇逆向转运的过程。本研究结果表明，金银花提取物能显著降低血清中 TC 和 TG 含 量，且 300 mg/kg 组效果最好。200 和 300 mg/kg 组均能提高血清 HDL-C 含量，促进胆固醇 的逆向转运过程。 4 结 论 ① 饲粮中添加 300 mg/kg 金银花提取物可以显著提高蛋鸡平均蛋重和平均日采食量，且对 蛋鸡生产性能无不良影响。 ② 饲粮中添加金银花提取物可以显著提高鸡蛋哈氏单位。 ③ 饲粮中添加金银花提取物可通过提高血清 HDL-C 含量，促进胆固醇逆向转运，降低蛋黄 胆固醇含量。 参考文献： [1] 康延国.中药鉴定学[M].3 版.北京:中国中医药出版社,2012:280–283. chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 [2] 王林青,崔保安,张红英.金银花药理作用研究进展[J].中国畜牧兽医,2007,34(11):91–95. 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